時(shí)間：2023-03-10 15:04:47
引言：易發(fā)表網(wǎng)憑借豐富的文秘實(shí)踐，為您精心挑選了九篇訪學(xué)邀請(qǐng)函范例。如需獲取更多原創(chuàng)內(nèi)容，可隨時(shí)聯(lián)系我們的客服老師。
專業(yè)的邀請(qǐng)函發(fā)放應(yīng)該包括6個(gè)步驟：1、拜訪計(jì)劃2、引導(dǎo)交談3、炒作會(huì)議講者及講課內(nèi)容4、處理異議5、到會(huì)的確認(rèn)6、跟進(jìn)。下面筆者就用一個(gè)實(shí)例來加以說明。背景是XX公司要舉辦一次關(guān)于偏頭痛的治療與預(yù)防以及該公司產(chǎn)品某藥品在偏頭痛中的治療經(jīng)驗(yàn)交流的學(xué)術(shù)會(huì)議，大會(huì)主席是XX醫(yī)院的W教授，邀請(qǐng)的講者是山東XX醫(yī)院A教授，時(shí)間是下周六下午兩點(diǎn)。邀請(qǐng)對(duì)象是市級(jí)某三甲醫(yī)院神經(jīng)內(nèi)科主任。
1，首先是炒作會(huì)議主題，這是需要做訪前計(jì)劃的，這個(gè)計(jì)劃應(yīng)該是圍繞此次的學(xué)術(shù)會(huì)議主題所準(zhǔn)備的，比如我們此次舉辦的是偏頭痛的規(guī)范治療學(xué)術(shù)會(huì)議，所以我們應(yīng)當(dāng)去了解目前醫(yī)生是否有比較系統(tǒng)規(guī)范的治療指南及流程。初步判定他所感興趣的話題，來炒作會(huì)議主題，讓他看到此次學(xué)術(shù)會(huì)議所能帶給他的利益。這是價(jià)值利益銷售的關(guān)鍵。其次請(qǐng)記住主任的時(shí)間是很寶貴的，所以你要在見面后最短的并且最合適的時(shí)間內(nèi)將自己的拜訪目的表述清楚，以至于不會(huì)讓客戶覺得你是在浪費(fèi)他的時(shí)間。
“主任，您好！我是XX公司的小左，負(fù)責(zé)XX產(chǎn)品的，不知道您還有印象沒？”
“哦，知道的，你有什么事嗎？”
“我剛看門診上患者還挺多的，偏頭痛患者占了不少。您看您是這方面的專家，您一定在偏頭痛的治療上有自己很多經(jīng)驗(yàn)，我今天是想就偏頭痛的規(guī)范治療和您做個(gè)探討，耽誤您5分鐘您看可以嗎？”
“偏頭痛是吧？行，你坐。”
2，因?yàn)檫@里所用的是一個(gè)相關(guān)疾病問題所做的開場(chǎng)白，所以80%是可以得到允許的，接著就要開始引導(dǎo)交談，探尋。我們可以運(yùn)用引導(dǎo)交談探尋技巧識(shí)別客戶的需求，并通過開放式及封閉式提問漏斗般的得出真正的需求，并放大及確認(rèn)引起他的重視。
“謝謝主任，您所遇到的偏頭痛的患者應(yīng)該是不計(jì)其數(shù)了吧，那么偏頭痛對(duì)患者的生活，家庭造成了怎樣的困擾呢？”
“偏頭痛是一種常見病，多發(fā)病，對(duì)社會(huì)經(jīng)濟(jì)和患者生活都造成比較嚴(yán)重的影響，發(fā)病輕重不一啊，輕則影響正常工作生活，重則生活不能自理，并且最近兩年確實(shí)有調(diào)查說偏頭痛患者在逐漸增加，可能跟環(huán)境和壓力也有很大關(guān)系。”
“那偏頭痛就患者本身而言會(huì)導(dǎo)致什么樣的后果呢？”
“那并發(fā)癥多哦，像什么小腦梗死，腦白質(zhì)病變，并且還有增加發(fā)生腦卒中及不穩(wěn)定心絞痛的風(fēng)險(xiǎn)。”
“也就是說偏頭痛不僅僅只是頭痛，而是可以帶來那么多不堪設(shè)想的隱患及后果，是嗎？“
“確實(shí)是這樣的。”
“如果有很好的治療方案為患者進(jìn)行系統(tǒng)的規(guī)范的治療，能夠緩解乃至改善癥狀，那么對(duì)患者來說可是對(duì)工作，生活，家庭都有了很大的幫助。那么您在這方面是專家，您是如何治療偏頭痛的呢？”
“偏頭痛的治愈確實(shí)能為患者帶來很大的變化，但是現(xiàn)在并沒有一個(gè)系統(tǒng)的規(guī)范治療方案，大家都是經(jīng)驗(yàn)性治療，根據(jù)偏頭痛的類型啊，癥狀啊進(jìn)行對(duì)癥治療，也很復(fù)雜，所以治愈率也不是很高。”
“也就是說，我們現(xiàn)在是缺乏一套規(guī)范的系統(tǒng)的治療方案，如果有的話是對(duì)您和患者來說是能幫助解決當(dāng)前很多問題的，是非常有價(jià)值的，對(duì)嗎？”
“是的。”
3，上面已經(jīng)確認(rèn)出客戶的真正需求，“一個(gè)系統(tǒng)的規(guī)范的治療偏頭痛方案”。這時(shí)候時(shí)機(jī)成熟，我們就可以立馬亮劍----亮出我們能滿足他需求的學(xué)術(shù)會(huì)議的邀請(qǐng)函。
“像您剛說到的這個(gè)問題，其他醫(yī)院的老師確實(shí)也都存在，也令很多老師真的是頭疼。我們?yōu)榱送苿?dòng)湖北地區(qū)在治療偏頭痛領(lǐng)域發(fā)展，更好的加強(qiáng)學(xué)術(shù)交流，所以特別邀請(qǐng)了XX醫(yī)院的A教授來做偏頭痛的報(bào)告，交流偏頭痛的診斷與防治專家共識(shí)，這是會(huì)議邀請(qǐng)函，剛好能為您在偏頭痛治療上帶來一些新的學(xué)術(shù)信息。”
“哦，邀請(qǐng)的A教授是吧？”
“是的，A教授是中華醫(yī)學(xué)會(huì)神經(jīng)內(nèi)科專業(yè)委員會(huì)的副主任委員，曾經(jīng)還在美國(guó)XXX醫(yī)院神經(jīng)內(nèi)科工作過，是《中華內(nèi)科雜志》《臨床神經(jīng)病學(xué)雜志》等多本醫(yī)學(xué)雜志的編委，也主編了多本著作。您應(yīng)該知道他吧？”
4，當(dāng)你做好了鋪墊工作已經(jīng)遞上了邀請(qǐng)函時(shí)，客戶多半會(huì)拋出異議，這個(gè)異議可能是客戶真實(shí)擔(dān)心的問題，也可能只是拒絕的托辭，所以我們應(yīng)該按照處理異議的4步法則來進(jìn)行處理。澄清--回答--核實(shí)--延續(xù)
“恩，A教授我知道，看過他的一些文章，還不錯(cuò)，是什么時(shí)候？”
“是的，A教授發(fā)表的很多關(guān)于神經(jīng)內(nèi)科學(xué)的文章都得了不少獎(jiǎng)項(xiàng)。會(huì)議時(shí)間是下周六下午2點(diǎn)，因?yàn)榭紤]到各位老師周六一般下午有時(shí)間，所以特意安排在這個(gè)時(shí)候，并且提前一周來邀請(qǐng)，您也好安排時(shí)間。”
“那好吧，到時(shí)候有時(shí)間沒有別的安排我會(huì)去的。”
5，其實(shí)到這里事情還沒有敲定，他并沒有和你達(dá)成協(xié)議，只是敷衍的說沒別的安排是會(huì)去的。所以接下來我們的到會(huì)確認(rèn)是非常重要的。
“不知道您對(duì)會(huì)議還有沒有什么其他的擔(dān)憂？”
“A教授的會(huì)以前我沒有參加過，文章寫的可以，但不知道講的怎么樣，本來這段時(shí)間醫(yī)院就比較忙！”
“我理解您的擔(dān)心，畢竟您的時(shí)間是很寶貴的，如果在一場(chǎng)毫無意義的會(huì)議上浪費(fèi)幾個(gè)小時(shí)是非常不值得的。而且主任您放心，公司特別注重此次會(huì)議，我們還特別邀請(qǐng)了湖北XX醫(yī)院的W教授做大會(huì)主席，我們?nèi)パ?qǐng)的時(shí)候，W教授聽說是請(qǐng)A教授來講，立馬就答應(yīng)了，因?yàn)樗犨^A教授的課，講的非常好。加上我們所邀請(qǐng)的嘉賓全部是湖北地區(qū)神經(jīng)內(nèi)科的主任專家，是絕對(duì)保證會(huì)議質(zhì)量的。您在神經(jīng)內(nèi)科界也是很有聲譽(yù)的，您也可以將您在這方面的治療經(jīng)驗(yàn)分享給其他老師。所以說這次會(huì)議對(duì)您和對(duì)其他專家都是很有價(jià)值的。”
“下周六下午2點(diǎn)半是吧？好的。我會(huì)去的。”
“那您看我下周五早上再給您打個(gè)電話提醒下，怕您到時(shí)候事情一多給忘了時(shí)間，周六中午1點(diǎn)30我到您家樓下接您。您看可以嗎？”
“那行，你直接到醫(yī)院來接我吧，我早上還在醫(yī)院上班。”
“好的，那我就不耽誤您了，主任再見！”
“再見！”
6，邀請(qǐng)函是很成功的發(fā)送出去了，接下來所承諾的跟進(jìn)也是不可缺少的環(huán)節(jié)。
定于XX年5月11日上午舉行教學(xué)開放日活動(dòng)。主題是:“共同學(xué)習(xí)，快樂體驗(yàn)”，現(xiàn)邀請(qǐng)您走進(jìn)校園、走進(jìn)教室，與孩子一起上課、一起參與活動(dòng)，了解課堂管理、學(xué)校要求，體驗(yàn)孩子在校的學(xué)習(xí)生活，以此為契機(jī)探索教育孩子的方法，以便共同教育孩子。現(xiàn)把相關(guān)事項(xiàng)通知以下：
一、活動(dòng)內(nèi)容
1、聽課。了解孩子上課表現(xiàn)、狀態(tài)，了解上課常規(guī)及要求。
2、參觀。參觀學(xué)校、班級(jí)文化氛圍建設(shè)，觀摩課堂、課間活動(dòng)，了解學(xué)校教育教學(xué)的要求和情況。
3、觀看表演。觀看學(xué)校跳繩隊(duì)表演，了解學(xué)校特色教育，體驗(yàn)孩子豐富的學(xué)習(xí)活動(dòng)。
4、參與活動(dòng)。學(xué)校舉行大課間毽繩體育活動(dòng)，家長(zhǎng)可以自帶器材，與自己的孩子共同參與跳繩、踢毽球活動(dòng)。
二、上課地點(diǎn)及時(shí)間安排
附1：家長(zhǎng)開放日上課安排表
節(jié)次
課程
班級(jí)
第二節(jié)（9:15-9:55）
第三節(jié)(10:05-11:00)
科目
任教教師
上課地點(diǎn)
科目
主持教師
活動(dòng)地點(diǎn)
一（1）班
音樂
xx
音樂室
讀書主題活動(dòng)
xx
一（1）課室
一（2）班
數(shù)學(xué)
xx
一（2）課室
xx
一（2）課室
二（1）班
數(shù)學(xué)
xx
二（1）課室
xx
二（1）課室
二（2）班
體育
x
足球場(chǎng)
xx
二（2）課室
三（1）班
電腦
科學(xué)
xx
xx
電腦室
自然室
xx
三（1）課室
三（2）班
數(shù)學(xué)
xx
三（2）課室
xx
三（2）課室
四（1）班
體育
xx
籃球場(chǎng)
xx
四(1)課室
四（2）班
英語美術(shù)
xx
xx
語音室
美術(shù)室
xx
四（2）課室
五（1）班
數(shù)學(xué)
xx
五(1)課室
xx
五（1）課室
五（2）班
數(shù)學(xué)
xx
五（2）課室
高芬芳
五（2）課室
六（1）班
英語
體育
xx
xx
電教室
羽毛球場(chǎng)
中小銜接主題班會(huì)
xx
六（1）課室
六（2）班
英語
xx
六(2)班
xx
六（2）課室
附2：家長(zhǎng)開放日活動(dòng)安排時(shí)間表
時(shí)間
活動(dòng)安排
8：45—9：10
家長(zhǎng)到校:參觀學(xué)校、班級(jí)文化建設(shè)等
9：15—9：55
家長(zhǎng)隨堂聽課。地點(diǎn)：子女所在班級(jí)
9：55—10：05
家長(zhǎng)簽到（各班主任處），課間休息
10：05－11：00
1---5年級(jí)讀書主題活動(dòng)。6年級(jí)中小銜接主題班會(huì)
11：00－11：10
課間休息
11：10－11：35
參與大課間活動(dòng)。地點(diǎn)：學(xué)校操場(chǎng)
11:35—11:45
觀看學(xué)校跳繩隊(duì)表演。地點(diǎn)：學(xué)校籃球場(chǎng)
11：45－11：55
校長(zhǎng)致辭
11：55－12：00
家長(zhǎng)及學(xué)生退場(chǎng)，結(jié)束本次開放日活動(dòng)
三、注意事項(xiàng)
1、因是正常上課時(shí)間，學(xué)校現(xiàn)有場(chǎng)地要用于學(xué)生活動(dòng)，故不能提供停車位，請(qǐng)家長(zhǎng)自行解決停車問題。
2、為了給學(xué)生一個(gè)榜樣作用，請(qǐng)家長(zhǎng)不要穿拖鞋、背心等參加活動(dòng)，做到衣著整潔、大方。
3、學(xué)校安排了家長(zhǎng)休息室，內(nèi)設(shè)有吸煙區(qū)、飲水處。課間家長(zhǎng)可以自行前往休息，校園內(nèi)除休息室其余地方請(qǐng)不要吸煙。
4、為了不影響孩子們上課，請(qǐng)家長(zhǎng)準(zhǔn)時(shí)參加，在打預(yù)備鈴后快速進(jìn)入課室并保持安靜。
您好！
碧桂花城學(xué)校真誠(chéng)感謝您一直以來對(duì)我們各項(xiàng)工作的關(guān)心、支持、理解與信任。我們深知：學(xué)校一切成績(jī)的取得都離不開您的關(guān)注與付出；學(xué)校的發(fā)展離不開您的關(guān)心和支持；孩子的成長(zhǎng)更加離不開家長(zhǎng)、學(xué)校的共同教育。
伴著您始終如一的信任與支持，花城學(xué)校憑借著鮮明的辦學(xué)特色、突顯的教育教學(xué)質(zhì)量在佛山地區(qū)已步入名校之列，各項(xiàng)榮譽(yù)接踵而來，獲獎(jiǎng)喜訊頻頻不斷，這是社會(huì)以及各級(jí)教育主管部門對(duì)我們工作的認(rèn)可，更是鼓勵(lì)和鞭策！
為進(jìn)一步做好孩子的教育工作，加強(qiáng)學(xué)校和家長(zhǎng)之間的溝通和交流，我們擬定于 XX年5月17日（星期五）下午舉行家長(zhǎng)會(huì)暨教學(xué)開放日活動(dòng)。
本次活動(dòng)，我們秉承一貫的做法，課堂將全面對(duì)外開放，屆時(shí)將有54位老師的54節(jié)公開課對(duì)外展示。展示課結(jié)束之后，全校將舉行體育大課間活動(dòng)，充分展示孩子們良好的精神面貌，全面體現(xiàn)孩子們?cè)趯W(xué)校的每一天都是開心的，每一天都是進(jìn)步的！
我們期盼您的到來！真誠(chéng)希望您對(duì)我們的工作提出寶貴意見！讓我們家校聯(lián)手，共育英才！
最后，祝您和您的家人身體健康，闔家歡樂！
此致
一年之計(jì)在于春，歲歲青草踏青生。美麗的****學(xué)校隱于**湖畔，山水與姹紫千紅互輝映，花鳥與書香學(xué)子相映紅，一副絕妙的春日山水畫卷隨山澗溪流掠影驚鴻。不可否認(rèn)，這里不僅僅是蘊(yùn)含春意的絕境，更是學(xué)子為學(xué)的圣境。對(duì)于孩子將要進(jìn)入的中學(xué)，這樣的景物絕佳處是否曾進(jìn)入過您的眼里心里?在此，我們誠(chéng)摯地邀請(qǐng)您及您的孩子在這山花爛漫時(shí)節(jié)光臨****學(xué)校，參加“****學(xué)校開放日活動(dòng)”，感受春日里那一抹學(xué)子書香!
活動(dòng)時(shí)間：
**月**日 13:30—16:20
地址：******區(qū)**路***號(hào)
網(wǎng)址：
(具體線路詳見網(wǎng)站首頁“交通線路”)
活動(dòng)流程：
13:30—14:30 聆聽講座 了解辦學(xué)理念
14:50—15:50 欣賞表演 領(lǐng)略學(xué)生風(fēng)采
16:00—16:30 參觀校園 感受學(xué)校氛圍
我們相信：
來訪時(shí)，您一定會(huì)將車輛有序停放在校門外以維護(hù)校園安全;
參觀時(shí)，您的一言一行一定會(huì)與****學(xué)校的校園氛圍默契合拍;
離開前，您一定樂于為****學(xué)校留下寶貴的意見和建議。
請(qǐng)您發(fā)短信致手機(jī)號(hào)碼***********進(jìn)行預(yù)約，發(fā)送格式為:孩子姓名+畢業(yè)小學(xué)名稱+參加人數(shù)。為保證“****學(xué)校開放日活動(dòng)”安全有序，請(qǐng)您務(wù)必?cái)y帶此邀請(qǐng)函參加活動(dòng)!
春天里，期待與您相約在美麗的**湖畔!
【關(guān)鍵詞】 復(fù)方中藥； NCI-H460細(xì)胞； 血清藥理學(xué)
隨著環(huán)境污染的增加及人們各種不良的生活習(xí)慣，癌癥的發(fā)病率正在不斷上升[1]。癌癥是一大類惡性腫瘤的統(tǒng)稱，是目前嚴(yán)重危害人類健康的一大頑癥，嚴(yán)重威脅著人類的生活質(zhì)量，被稱為人類健康的第一殺手[2]。肺癌屬于中醫(yī)學(xué)肺積、咳嗽、咯血、胸痛等范疇，一般認(rèn)為肺癌的發(fā)生是由于人體正氣不足，陰陽氣血失調(diào)，使臟腑經(jīng)絡(luò)的功能發(fā)生障礙，機(jī)體抗病能力降低，邪氣乘虛而入，滯留于肺，日久形成腫塊而成肺癌[3]。目前，癌癥的預(yù)防和治療方法已經(jīng)有很多，雖然療效顯著，但是毒副作用大的問題使很多藥的臨床應(yīng)用受到了限制[4]。中草藥以其毒副作用小、不易產(chǎn)生耐藥性的優(yōu)點(diǎn)在腫瘤治療領(lǐng)域越來越受重視。中草藥復(fù)方、單味藥提取物或一些單體成分可抑制脂質(zhì)過氧化反應(yīng)、清除活性氧自由基、提高機(jī)體抗氧化酶活力[5-6]，從而抑制癌癥。近年來，中草藥在抗癌方面取得了很大的成就，其機(jī)制是非常復(fù)雜的，不能簡(jiǎn)單的用現(xiàn)代醫(yī)學(xué)的某個(gè)觀點(diǎn)來概括說明[7]。中醫(yī)藥對(duì)腫瘤治療的主要理論基礎(chǔ)是扶正、固本、驅(qū)邪，目前的研究主要集中于單味藥的研究，多為體外試驗(yàn)[8]。本研究采用了夏枯草、膽南星、玄參、龍血竭、冰糖草等8種中草藥，共有3個(gè)復(fù)方，各復(fù)方中草藥的配伍組成和含量不同，A復(fù)方由8種中草藥組成，B復(fù)方由其中4種中草藥配伍組成，C復(fù)方由其中2種中草藥配伍組成。夏枯草為唇形科夏枯草屬植物，主要含有三萜及其苷類 苯丙素類、甾醇及其苷類、黃酮類、香豆素、有機(jī)酸、揮發(fā)油及糖類等[9]，味辛、苦，性寒，有降糖、降壓、抗菌、抗病毒、抗炎、抗腫瘤及活血化瘀等功效[10]。膽南星為制天南星的細(xì)粉與牛、羊或豬膽汁經(jīng)加工而成，或?yàn)樯炷闲羌?xì)粉與牛、羊或豬膽汁經(jīng)發(fā)酵加工而成，在臨床上用于痰熱咳嗽，咳痰黃稠，中風(fēng)痰迷，癲狂驚癇等癥[11]。玄參為玄參科植物玄參的干燥塊根，是常用的傳統(tǒng)中藥；其味甘、苦、咸、性微寒，具涼血滋陰、瀉火解毒的功效[12]，現(xiàn)臨床主要用于熱病煩渴、發(fā)斑、齒齦炎、扁桃體炎、急性淋巴結(jié)炎等[13]。龍血竭又名麒麟竭，為傳統(tǒng)名貴中藥，國(guó)產(chǎn)龍血竭的化學(xué)成分有黃酮、苷類、酚類、糖類等化合物[14]，龍血竭不溶于水，具有抗炎、止痛的作用，能抑制毛細(xì)血管的通透性，減少滲出，明顯抑制腫脹、縮短凝血時(shí)間，促進(jìn)創(chuàng)面愈合，有效改善機(jī)體的免疫功能[15]。冰糖草為玄參科植物野甘草的全草，是壯族地區(qū)常用的一味壯藥，其味甜，性涼，具有清熱毒、除濕毒、通氣道和水道的功效[16]，主治感冒發(fā)熱，肺熱咳嗽，咽喉腫痛，腸炎，痢疾，腳氣水腫等[17]。我國(guó)現(xiàn)有中藥材資源12 807種，是世界上最大的藥材生產(chǎn)國(guó)。以傳統(tǒng)中草藥的理論和數(shù)千年臨床實(shí)踐為基礎(chǔ)，結(jié)合現(xiàn)代藥學(xué)理論和技術(shù)，嚴(yán)格進(jìn)行藥學(xué)、藥效學(xué)與臨床研究，抗癌中草藥的開發(fā)和臨床應(yīng)用將有新的更大進(jìn)展[18]。本課題采用血清藥理學(xué)聯(lián)合MTT法，研究3種復(fù)方中藥對(duì)人大細(xì)胞肺癌細(xì)胞株NCI-H460細(xì)胞的體外抑制作用。現(xiàn)報(bào)道如下。
1 材料與方法
1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物和細(xì)胞株 健康成年的SD大鼠（200±20）g，SPF級(jí)，雌雄各半，由廣西醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物生產(chǎn)許可證號(hào)：SCXK桂2014-0002，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物使用許可證號(hào)：SCXK桂2014-0004。人大細(xì)胞肺癌細(xì)胞NCI-H460購(gòu)于中國(guó)科學(xué)院上海細(xì)胞庫(kù)。
1.2 實(shí)驗(yàn)藥物 由夏枯草、膽南星、玄參、龍血竭、冰糖草等8種中草藥按不同比例組成，由北海博鏵醫(yī)院提供。注射用環(huán)磷酰胺，0.2 g/mL，百特醫(yī)療用品貿(mào)易有限公司，批號(hào)：5F063A。
1.3 實(shí)驗(yàn)器材 超凈工作臺(tái)、CO2培養(yǎng)箱、倒置顯微鏡、臺(tái)式離心機(jī)、酶標(biāo)儀、電子天平、恒溫水浴鍋、高壓滅菌器、-80 ℃低溫冰箱。
1.4 實(shí)驗(yàn)方法
1.4.1 含藥血清制備實(shí)驗(yàn)
1.4.1.1 3種復(fù)方中藥的制備 稱取夏枯草、膽南星、玄參、龍血竭、冰糖草等8種中草藥按不同比例用純凈水提取，A復(fù)方，由以上8種中草藥組成；B復(fù)方由以上中草藥中的4種組成；C復(fù)方由以上中草藥中的2種組成，濃縮藥液濃度至0.1 g/mL，置冰箱4 ℃保存?zhèn)溆谩?/p>
1.4.1.2 注射用環(huán)磷酰胺的制備 環(huán)磷酰胺治療肝癌的成人日用量為4 mg/kg，每日或隔日1次。根據(jù)人和動(dòng)物間每公斤體重折算系數(shù)表，換算出大鼠的劑量為成人用量的6倍左右（即25 mg/kg）。
1.4.1.3 含藥血清的制備 SPF健康成年的SD大鼠15只，隨機(jī)分為5組，即空白組、A復(fù)方組、B復(fù)方組、C復(fù)方組和環(huán)磷酰胺組，每組3只。給藥前禁食不禁水12 h，空白組灌胃等量的生理鹽水，A復(fù)方組、B復(fù)方組和C復(fù)方組分別以2000 mg/kg灌胃，環(huán)磷酰胺組以25 mg/kg腹腔注射。2次/d，
間隔12 h，連續(xù)給藥3 d。末次給藥后1 h腹主動(dòng)脈取血，取血后室溫下靜置4 h，3000 r/min離心
15 min，分離血清，經(jīng)56 ℃水浴滅活30 min后，0.22 ?m微孔濾膜過濾除菌，混合分裝于2 mL EP管中，置-20 ℃保存?zhèn)溆谩?/p>
1.4.2 體外抑瘤實(shí)驗(yàn)（MTT法）
1.4.2.1 細(xì)胞培養(yǎng) 從-80 ℃低溫冰箱中取出人大細(xì)胞肺癌NCI-H460細(xì)胞，迅速放于37 ℃水浴鍋中，并來回晃動(dòng)使其在1 min內(nèi)完全融化。在超凈臺(tái)中取出細(xì)胞轉(zhuǎn)移至15 mL離心管內(nèi)，在1000 r/min離心5 min，棄去上層液體，將人大細(xì)胞肺癌NCI-H460細(xì)胞置于含有10%胎牛血清及雙抗的RPMI 1640培養(yǎng)液中培養(yǎng)，將培養(yǎng)瓶置于37 ℃、5%CO2的恒溫培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)，待細(xì)胞養(yǎng)至覆蓋培養(yǎng)瓶瓶底80%～90%，用0.25%胰蛋白酶（1%胰酶∶0.2%EDTA=1∶3）M行消化，當(dāng)細(xì)胞處于對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期后進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。
1.4.2.2 MTT法檢測(cè) 用不含血清的培養(yǎng)基將含藥血清稀釋成5%、10%、20%、30%的濃度。取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的細(xì)胞株NCI-H460細(xì)胞，用胰酶消化后制成細(xì)胞懸液，調(diào)整細(xì)胞濃度至5×104個(gè)/mL，接種于96孔培養(yǎng)板，每孔0.1 mL細(xì)胞懸液，板周邊的孔不加細(xì)胞，留空白調(diào)零，即只加培養(yǎng)液不加細(xì)胞，將培養(yǎng)板置于37 ℃、5%CO2的恒溫培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)24 h。貼壁后吸出原培養(yǎng)液，分別加入空白組、依癌膠囊組和環(huán)磷酰胺組各個(gè)濃度的含藥血清培養(yǎng)液，每組設(shè)5個(gè)復(fù)孔，繼續(xù)培養(yǎng)24、48 h后，每孔加入5 g/L的MTT溶液10 ?L，37 ℃、5%CO2的恒溫培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)4 h后，吸出原培養(yǎng)液，加入150 μL的二甲基亞砜（DM-SO），振蕩10 min，在酶標(biāo)儀上于510 nm處測(cè)定每孔的吸光度（OD值），重復(fù)測(cè)3次。計(jì)算藥物對(duì)細(xì)胞的抑制率：抑制率（IR）=（1-實(shí)驗(yàn)組平均OD值/對(duì)照組平均OD值）×100%。
1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用SPSS 17.0軟件對(duì)所得數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，計(jì)量資料用（x±s）表示，比較采用t檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料以率（%）表示，比較采用 字2檢驗(yàn)。以P
2 結(jié)果
在所選的濃度范圍內(nèi)，3種復(fù)方中藥含藥血清對(duì)體外培養(yǎng)的NCI-H460細(xì)胞均有明顯的抑制作用，其中B復(fù)方組對(duì)NCI-H460細(xì)胞的抑制效果要較對(duì)A復(fù)方組和C復(fù)方組更顯著。24 h時(shí)，5%、10%、30%濃度的含藥血清對(duì)NCI-H460細(xì)胞抑制率：B復(fù)方組>環(huán)磷酰胺組>A復(fù)方組>C復(fù)方組；20%濃度的含藥血清對(duì)NCI-H460細(xì)胞抑制率：B復(fù)方組>環(huán)磷酰胺組>C復(fù)方組>A復(fù)方組。48 h，5%、10%、20%、30%濃度的含藥血清對(duì)NCI-H460細(xì)胞抑制率：B復(fù)方組>環(huán)磷酰胺組>A復(fù)方組>C復(fù)方組。A復(fù)方組、B復(fù)方組、C復(fù)方組各濃度的含藥血清與空白組比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P
3 討論
肺癌是一種比較常見的惡性腫瘤，近年來，世界各國(guó)肺癌的發(fā)病率和死亡率均有明顯增高的趨勢(shì)[19]。中草藥治療惡性腫瘤以其毒副作用小的優(yōu)點(diǎn)廣為大家接受，中藥及其復(fù)方制劑能夠通過多種不同途徑、多種方法應(yīng)用于抗腫瘤臨床治療中，發(fā)揮獨(dú)特作用，盡可能避免正常細(xì)胞受到損傷，藥物毒副作用很小[20]。隨著中醫(yī)中藥在國(guó)際社會(huì)受重視的程度越來越高，中藥治療腫瘤將成為癌癥治療的一種重要途徑[21]。夏枯草、膽南星、玄參、龍血竭、冰糖草等8種中草藥均為我國(guó)傳統(tǒng)的中藥材，在殺滅腫瘤細(xì)胞和緩解癥狀體征方面有明顯效果。
本課題采用血清藥理學(xué)聯(lián)合MTT法，研究
3種復(fù)方中藥對(duì)人大細(xì)胞肺癌細(xì)胞株NCI-H460細(xì)胞的體外抑制作用。結(jié)果顯示，在所選的濃度范圍內(nèi)，3種復(fù)方中藥含藥血清對(duì)體外培養(yǎng)的NCI-H460細(xì)胞均有明顯的抑制作用，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P
參考文獻(xiàn)
[1]吳宇殊，王穎，張景蘭，等.癌癥病人化學(xué)治療的護(hù)理[J].實(shí)用腫瘤學(xué)雜志，2007，21（4）：400.
[2]楊康利.抗癌藥物的研究進(jìn)展[J].山東化工，2015，44（16）：81-82.
[3]鄧宏.肺癌的中醫(yī)藥治療進(jìn)展[J].新中醫(yī)，2001，33（4）：73-75.
[4]劉峰，魏新庭，王冬冬，等.抗癌藥物的研究現(xiàn)狀[J].聊城大學(xué)學(xué)報(bào)：自然科學(xué)版，2006，19（1）：39-43.
[5] Lj J，Ge R C，Zheng R L.Antioxidative and chelating activities of phenylpropanoid glycosides from Pedicularis striata[J].Acta Pharmcol Sin（中國(guó)藥理學(xué)報(bào)），1997，18（1）：77-82.
[6] Li J，Zheng Y，Zhou H，et al.Differentiation of human gastric adenocarcinoma cell line M Gc80-3 induced by verbascoside[J].Planta Med，1997，63（6）：499-502.
[7]張麗梅.中藥抗癌作用機(jī)制研究概況[J].中國(guó)醫(yī)藥指南，2009，7（6）：73-74.
[8]方曉陽.誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡的中藥研究[J].中草藥，2004，35（4）：471-474.
[9]孫維廣，廖慧麗.夏枯草化學(xué)及藥理研究概況[J].中國(guó)中醫(yī)藥信息雜志，2003，10（8）：86-88.
[10]莊玲玲.夏枯草藥理作用研究進(jìn)展[J].中國(guó)中醫(yī)藥信息雜志，2009，16（S1）：94-96.
[11]國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典（一部）[S].北京：中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，2010：245.
[12]華靜.玄參的化學(xué)成分研究[J].海峽藥學(xué)，2013，25（1）：35-37.
[13]謝小艷，夏春森.中藥玄參的化學(xué)成分及藥理研究進(jìn)展[J].亞太傳統(tǒng)醫(yī)藥，2010，5（6）：121.
[14]周志宏，王錦亮，楊崇仁.國(guó)產(chǎn)血竭的化學(xué)成分研究[J].中草藥，2001，32（6）：484.
[15]李華（綜述）.中成藥龍血竭治療壓瘡的現(xiàn)狀問題及展望[J].護(hù)理學(xué)報(bào)，2011，18（14）：22-24.
[16]廣西壯族自治區(qū)食品藥品監(jiān)督管理局.廣西壯族自治區(qū)壯藥質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)（第二卷）[M].南寧：廣西科學(xué)技術(shù)出版社，2011：134.
[17]國(guó)家中醫(yī)藥管理局.中華本草（第七冊(cè)）[M].上海：上海科學(xué)技術(shù)出版社，1999：389.
[18]王三龍，蔡兵.中草藥及其活性成分抗腫瘤的研究進(jìn)展[J].中草藥，2003，34（9）：U012-U015.
[19] She J，Yang P，Hong Q，et al.Lung cancer in China：challenges andinterventions[J].Chest，2013，143（4）：1117-1126.
[20]駱劍蛟.中藥及其復(fù)方制劑在抗腫瘤中的作用分析[J].中國(guó)中醫(yī)藥現(xiàn)代遠(yuǎn)程教育，2014，12（14）：108-109.
益氣消積方（Yiqi Xiaoji Recipe， YQXJR）是根據(jù)上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院瑞金醫(yī)院中醫(yī)科主任沈小珩教授十多年致力于腫瘤研究的臨床經(jīng)驗(yàn)，并結(jié)合臨床實(shí)踐總結(jié)而出的新一代抗癌復(fù)方，臨床觀察對(duì)胃癌有較好的治療作用。本次實(shí)驗(yàn)采用益氣消積方含藥血清，溫育體外培養(yǎng)的人胃癌NKN28細(xì)胞，通過甲基噻唑基四唑（methyl thiazolyl tetrazolium， MTT）法檢測(cè)細(xì)胞增殖抑制作用，研究該方對(duì)體外培養(yǎng)的人胃癌NKN28細(xì)胞生長(zhǎng)的影響。
1 材料與方法
1.1 實(shí)驗(yàn)材料 SD大鼠50只，雄性，清潔級(jí)動(dòng)物，體質(zhì)量（250±30）g，由上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院瑞金醫(yī)院動(dòng)物房提供；人胃癌高分化腺癌細(xì)胞系NKN28細(xì)胞，由上海瑞金醫(yī)院消化內(nèi)科實(shí)驗(yàn)室負(fù)責(zé)孵育提供；益氣消積方主要由黃芪、全蝎和白花蛇舌草等組成，生藥購(gòu)自上海瑞金醫(yī)院中藥房，由中藥房代煎，上海中藥研究所實(shí)驗(yàn)室濃縮而成，含生藥量為2.8 g/ml；RPMI1640培養(yǎng)液、胰蛋白酶為Gibco公司分裝，批號(hào)31800022；新生牛血清，杭州四季青生物工程材料研究所產(chǎn)品；MTT，上海實(shí)生細(xì)胞生物技術(shù)有限公司；二甲基亞砜（dimethyl sulphoxide， DMSO），美國(guó)Fisher科學(xué)世界公司香港分公司產(chǎn)品；TE2000U多功能倒置相差顯微鏡，日本Nikon公司產(chǎn)品；MK3酶標(biāo)儀，芬蘭雷勃公司產(chǎn)品。
1.2 益氣消積方含藥血清的制備
1.2.1 含藥血清的制備 選用正常SD大鼠36只，禁食12 h后，予益氣消積方煎液灌胃給藥。大鼠分為3個(gè)劑量組（每組12只）分別給藥，給藥劑量分別為，低劑量組1.17 g/kg，中劑量組5.85 g/kg，高劑量組11.7 g/kg，分別相當(dāng)于60 kg成日用量的同倍、5倍、10倍。給藥方式為每天分2次給藥，即采用一次及二次重復(fù)（2 h后相同劑量重復(fù)給藥一次）給藥方法。連續(xù)灌胃3 d，第3天第1次給藥2 h后再給藥1次，1 h后，乙醚麻醉，無菌條件下腹主動(dòng)脈取血，靜置2 h以上，1 500 r/min，離心15 min，10 min后取血清，按灌胃濃度分別混合，56 ℃，30 min滅活，分裝，－20 ℃冰箱保存?zhèn)溆茫?］。
1.2.2 大鼠正常血清制備 對(duì)照組SD大鼠14只用生理鹽水灌胃，每只2 ml/次，2次/d，連續(xù)3 d。于第3天第1次灌胃2 h后再灌胃1次，1 h后，乙醚麻醉，無菌條件下腹主動(dòng)脈取血，靜置2 h以上，1 500 r/min，離心15 min，10 min后取血清，56 ℃，30 min滅活，分裝，－20 ℃冰箱保存?zhèn)溆谩?/p>
1.3 細(xì)胞培養(yǎng) NKN28細(xì)胞株常規(guī)培養(yǎng)于含10％新生牛血清的RPMI1640培養(yǎng)基（含硫酸慶大霉素0.025 U/ml）中，于37 ℃、5％ CO2孵育箱中進(jìn)行連續(xù)培養(yǎng)［2］。
1.4 倒置顯微鏡下細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)觀察 上述培養(yǎng)細(xì)胞，去掉培養(yǎng)液，分別加入以上各組血清，在CO2培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)24 h和48 h，將培養(yǎng)瓶在倒置顯微鏡下作生長(zhǎng)狀態(tài)觀察。
1.5 細(xì)胞抑制率的檢測(cè) 取濃度為1×105個(gè)/ml處于對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期貼壁生長(zhǎng)的人胃癌NKN28細(xì)胞，按1×104個(gè)細(xì)胞/孔的濃度接種于96孔培養(yǎng)板（200 μl/孔），放入37 ℃，5% CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24 h后取出，吸棄培養(yǎng)板上清后加入高、中、低濃度含藥血清及空白血清，每種濃度設(shè)1/2、1/4、1/8、1/16四種不同比例，200 μl/孔，每種比例設(shè)6個(gè)復(fù)孔。放回培養(yǎng)箱中，使藥物與細(xì)胞共同孵育48 h和72 h。取出培養(yǎng)板，向每孔加入MTT 20 μl，繼續(xù)培養(yǎng)2 h后終止培養(yǎng)，小心吸去孔內(nèi)上清，每孔加入DMSO 150 μl，再放回培養(yǎng)箱中培養(yǎng)30 min，使結(jié)晶物充分溶解之后，在酶聯(lián)免疫檢測(cè)儀570 nm處讀取各孔光密度值（即OD值）。抑瘤率（％）=（1－OD實(shí)驗(yàn)組/OD對(duì)照組）×100［3］。
1.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS 11.5統(tǒng)計(jì)軟件包進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，計(jì)量資料以x±s表示，組間比較用單因素方差分析和LSD檢驗(yàn)。
2 結(jié)果
2.1 人胃癌NKN28細(xì)胞生長(zhǎng)狀況 倒置顯微鏡下，對(duì)照組的人胃癌NKN28細(xì)胞可見貼壁生長(zhǎng)，細(xì)胞形態(tài)呈梭形，胞漿均勻，細(xì)胞透明，相鄰細(xì)胞生長(zhǎng)融合成片；而經(jīng)含藥血清處理的各組細(xì)胞，24 h可見細(xì)胞由貼壁而脫落，至48 h脫落更明顯，脫落細(xì)胞懸浮于培養(yǎng)液中，細(xì)胞形態(tài)變圓或不規(guī)則，細(xì)胞變暗。比較含藥血清各組細(xì)胞生長(zhǎng)狀況，以高劑量組含藥血清組作用48 h脫落最明顯。說明益氣消積方有抑制人胃癌NKN28細(xì)胞生長(zhǎng)的作用，呈現(xiàn)一定的時(shí)間濃度依賴性。
2.2 MTT檢測(cè)結(jié)果
2.2.1 48 h不同濃度不同比例含藥血清的抑瘤作用 經(jīng)單因素方差分析，四組48 h不同濃度不同比例含藥血清對(duì)人胃癌NKN28細(xì)胞的抑瘤率差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。經(jīng)LSD組間檢驗(yàn)，在1/2、1/4血清比例時(shí)，高、中劑量組的抑瘤率均明顯高于空白血清組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01），低劑量組的抑瘤率略高于空白血清組，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）；在1/8血清比例時(shí)，高劑量組的抑瘤率高于空白血清組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01），中、低劑量組的抑瘤率略高于空白血清組，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）；在1/16血清比例時(shí)，高、中、低三個(gè)劑量組的抑瘤率略高于空白血清組，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。同時(shí)1/2、1/4、1/8血清比例時(shí)，高劑量的抑瘤率明顯高于各低劑量組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；1/16血清比例時(shí)，高劑量的抑瘤率略高于各低劑量組，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。說明益氣消積方有抑制人胃癌NKN28細(xì)胞增殖的作用，其抑制作用以高劑量組最佳。見表1。
2.2.2 72 h不同濃度不同比例含藥血清的抑瘤率 經(jīng)單因素方差分析，四組72 h不同濃度不同比例含藥血清對(duì)人胃癌NKN28細(xì)胞的抑制率差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。經(jīng)LSD組間檢驗(yàn)，在各血清比例時(shí)，高劑量組的抑制率均高于空白血清組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。在1/2、1/4血清比例時(shí)，中劑量組的抑制率高于空白血清組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）；在1/2血清比例時(shí)，低劑量組抑瘤率高于空白血清組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。在各血清比例時(shí)，高劑量組的抑瘤率均高于各低劑量組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。說明益氣消積方有抑制人胃癌NKN28細(xì)胞增殖的作用，且這種抑制作用隨著中藥濃度及時(shí)間的增加而有所提高。見表2。
表1 48 h不同濃度不同比例含藥血清的抑瘤率（略）
Table 1 Inhibition rates of NKN28 cells after 48hour treatment of four groups of rat serum
*P＜0.05， vs normal control serum group; P＜0.05， vs highdose group.
表2 72 h不同濃度不同比例含藥血清的抑瘤率（略）
Table 2 Inhibition rates of NKN28 cells after 72hour treatment of four groups of rat serum
*P＜0.05， vs normal control serum group; P＜0.05， vs highdose group.
3 討論
本實(shí)驗(yàn)采用血清藥理學(xué)方法觀察了益氣消積方含藥血清抑制人胃癌NKN28細(xì)胞增殖的作用。益氣消積方以黃芪益氣扶正為君藥，白花蛇舌草和全蝎清熱、解毒、消積為臣藥。藥理研究證實(shí)白花蛇舌草提取物能激活T細(xì)胞，使其釋放干擾素γ，殺死腫瘤細(xì)胞，具有抗突變、抗煙焦油對(duì)淋巴細(xì)胞DNA的殺傷和增強(qiáng)人體非特異性免疫功能的作用；白花蛇舌草中含有微量元素如有機(jī)鍺，對(duì)氧自由基有較強(qiáng)的清除作用［4］。馬氏鉗蝎蝎毒可抑制和阻斷人食管癌細(xì)胞從G0/G1向S期增殖，從而抑制癌細(xì)胞增殖。其抗腫瘤作用，一是通過增強(qiáng)免疫功能取效，二是通過抑制癌細(xì)胞內(nèi)DNA合成，直接影響腫瘤的生存和增殖［5］。本實(shí)驗(yàn)表明，益氣消積方有較好的抑制人胃癌NKN28細(xì)胞生長(zhǎng)的作用，且這種抑瘤作用呈現(xiàn)出時(shí)間、濃度依賴性。
參考文獻(xiàn)
1 Li YK， Wu JY. The disscusion of "ordinary method" of obtaining serum in serum pharmacology method. Zhongguo Yao Li Xue Tong Bao. 1999; 15(6): 569570. Chinese with abstract in English.
李儀奎， 吳健宇. 血清藥理學(xué)實(shí)驗(yàn)中采血時(shí)間的通法方案. 中國(guó)藥理學(xué)通報(bào). 1999; 15(6): 569570.
2 Min CY， Li QM， Liu HQ. The effect of "Jian Pi Dao Zhi Fang" on human gastric carcinoma cells. Zhong Yao Cai. 2004; 27(12): 935937. Chinese with abstract in English.
閔存云， 李慶明， 劉和強(qiáng). 健脾導(dǎo)滯方對(duì)人胃癌細(xì)胞的作用. 中藥材. 2004; 27(12): 935937.
3 Chen NN， Huang SL， Xiang Y， et al. Effects of inactivated rabbit serum containing compound realgar and natural indigo tablet on cell line NB4. Zhong Xi Yi Jie He Xue Bao. 2007; 5(1): 6569. Chinese with abstract in English.
陳楠楠， 黃世林， 向陽， 等. 復(fù)方黃黛片含藥滅活兔血清對(duì)NB4細(xì)胞株的作用. 中西醫(yī)結(jié)合學(xué)報(bào). 2007; 5(1): 6569.
4 Qian YX， Zhao HR， Gao Z. The antitumor activity in vitro of ethanol extract from oldenlandia diffuse. Jiangsu Yao Xue Yu Lin Chuang Yan Jiu. 2004; 12(4): 3638. Chinese with abstract in English.
【關(guān)鍵詞】 內(nèi)質(zhì)網(wǎng); 衣霉素; 葡萄糖調(diào)節(jié)蛋白78; 凋亡促進(jìn)因子CCAAT/增強(qiáng)子結(jié)合蛋白同源蛋白; 小鼠
內(nèi)質(zhì)網(wǎng)（endoplasmic reticulum， ER）廣泛存在于真核細(xì)胞中，是蛋白質(zhì)合成、折疊、運(yùn)輸以及細(xì)胞內(nèi)鈣離子儲(chǔ)存的主要場(chǎng)所。內(nèi)質(zhì)網(wǎng)中鈣離子紊亂和未折疊蛋白質(zhì)蓄積可引發(fā)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激（endoplasmic reticulum stress， ERS），發(fā)生具有保護(hù)作用的未折疊蛋白反應(yīng)（unfolded protein response， UPR）。內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激直接影響應(yīng)激細(xì)胞的轉(zhuǎn)歸，如修復(fù)、損傷或凋亡。神經(jīng)系統(tǒng)許多疾病與內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激相關(guān)。最近的研究表明，內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激介導(dǎo)的凋亡信號(hào)傳導(dǎo)途徑可能與阿爾茨海默病（Alzheimer disease， AD）的發(fā)病有關(guān)。本研究觀察滋補(bǔ)脾陰方藥（Zibu Piyin Recipe， ZBPYR）含藥血清對(duì)由N糖鏈抑制劑衣霉素（tunicamycin， Tm）引起的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激的影響，以探討其神經(jīng)保護(hù)機(jī)制。
1 材料與方法
1.1 實(shí)驗(yàn)藥物 滋補(bǔ)脾陰方藥由清代吳澄《不居集》中資成湯加味而成，由紅參30 g，山藥15 g，茯苓15 g，白芍15 g，丹參12 g，白扁豆15 g，蓮肉20 g，石菖蒲10 g，遠(yuǎn)志10 g，檀香4.5 g，橘紅9 g，甘草9 g組成，均購(gòu)自大連醫(yī)藥集團(tuán)藥材公司。中藥常規(guī)水煎，每毫升中藥液含生藥3.29 g，4 ℃保存?zhèn)溆谩?/p>
1.2 主要試劑和儀器 達(dá)爾伯克改良伊格爾培養(yǎng)基（Dulbecco's modified eagle's medium， DMEM)和胎牛血清，Gibco公司產(chǎn)品；胰蛋白酶和TRIReagent，Sigma公司產(chǎn)品；Tm，星形孢菌素（staurosporine， STS），日本W(wǎng)ako公司產(chǎn)品；細(xì)胞毒性檢測(cè)試劑盒，Roche公司產(chǎn)品；RNase OUT和Oligo (dt)，Invitrogen公司產(chǎn)品。二氧化碳恒溫培養(yǎng)箱，Thermo Forma公司產(chǎn)品；臺(tái)式高速冷凍離心機(jī)，Sigma公司產(chǎn)品；UV754紫外分光光度計(jì)，上海分析儀器總廠產(chǎn)品；溫度梯度PCR擴(kuò)增儀，Thermo Hybaid公司產(chǎn)品；酶標(biāo)儀，美國(guó)BIOTEKTM公司產(chǎn)品；凝膠成像分析系統(tǒng)，UVP公司產(chǎn)品。
1.3 中藥血清制備 取健康雄性SD大鼠（220～250 g）12只，隨機(jī)分為對(duì)照組和ZBPYR組，每組6只。適應(yīng)飼養(yǎng)3 d后，ZBPYR組給予滋補(bǔ)脾陰方藥灌胃，10 ml/kg體質(zhì)量，此劑量灌胃2次/d，連續(xù)3 d；對(duì)照組給予等體積生理鹽水灌胃。于末次給藥后1 h腹主動(dòng)脈取血，靜置2 h，2 000 r/min，4 ℃離心15 min分離血清，離心半徑為16.1 cm，56 ℃，30 min滅活。0.22 μm濾膜過濾除菌，－20℃保存?zhèn)溆谩?/p>
1.4 Neuro2a細(xì)胞的培養(yǎng) 小鼠神經(jīng)瘤母細(xì)胞Neuro2a細(xì)胞株由日本北海道大學(xué)藥學(xué)部野村靖幸教授惠贈(zèng)。細(xì)胞常規(guī)復(fù)蘇后加入培養(yǎng)液于5% CO2、37 ℃培養(yǎng)箱培養(yǎng)。細(xì)胞單層長(zhǎng)滿后用終濃度為0.25%胰蛋白酶37 ℃條件下消化3 min，以1∶3傳代。培養(yǎng)液含90% DMEM、10%胎牛血清和1％雙抗。細(xì)胞長(zhǎng)至第三代可以使用。
1.5 乳酸脫氫酶釋放試驗(yàn) Neuro2a細(xì)胞接種后分為對(duì)照組、10％空白血清組、5％ZBPYR組、10％ZBPYR組、15％ZBPYR組、Tm（5 μg/ml）組、10％空白血清＋Tm（5 μg/ml）組、5％ ZBPYR＋Tm（5 μg/ml）組、10％ ZBPYR＋Tm（5 μg/ml）組、15％ ZBPYR＋Tm（5 μg/ml）組。細(xì)胞單層長(zhǎng)至70％時(shí)按以上分組給予相應(yīng)刺激。刺激后細(xì)胞放入5％CO2、37℃培養(yǎng)箱繼續(xù)培養(yǎng)48 h后用乳酸脫氫酶（lactate dehydrogenase， LDH）釋放試驗(yàn)檢測(cè)LDH泄漏率。LDH實(shí)驗(yàn)步驟按試劑盒說明執(zhí)行。LDH泄漏率為細(xì)胞上清中LDH活性與細(xì)胞總的LDH活性比值。LDH活性測(cè)定用酶標(biāo)儀于490 nm處檢測(cè)。另外Neuro2a細(xì)胞接種后分為對(duì)照組、STS（0.1 μmol/L）組、10％空白血清＋STS（0.1 μmol/L）組、15％ ZBPYR＋STS（0.1 μmol/L）組，待細(xì)胞單層長(zhǎng)至70％時(shí)按以上分組給予相應(yīng)刺激。刺激后細(xì)胞放入5％ CO2、37 ℃培養(yǎng)箱繼續(xù)培養(yǎng)48 h后檢測(cè)LDH泄漏率。
1.6 逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng) 實(shí)驗(yàn)分組同前。細(xì)胞單層長(zhǎng)至90％時(shí)按以上分組給予相應(yīng)刺激。細(xì)胞放入5％ CO2、37 ℃培養(yǎng)箱繼續(xù)培養(yǎng)6 h。總RNA的提取和逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)。（1）收集細(xì)胞用TRIReagent提取總RNA。用紫外分光光度計(jì)測(cè)定A260/A280，計(jì)算RNA濃度。（2）逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)。反應(yīng)體系為20 μl。取2 μg總RNA，加二乙基焦磷酰胺（diethyl pyrocarbonate， DEPC）水至總體積為9 μl，加0.5 μl Oligo (dt) 1218引物混合后，置70 ℃變性10 min。然后加入下列成分：5×第一鏈緩沖液5.875 μl、10 mmol/L dNTP 2 μl、0.1 mol/L DTT 2 μl、RNase抑制劑0.5 μl和逆轉(zhuǎn)錄酶0.125 μl，混合使反應(yīng)總體系為20 μl。放入46 ℃反應(yīng)1.5 h，70 ℃變性15 min，冰上5 min后進(jìn)行擴(kuò)增。（3）PCR反應(yīng)。在0.2 ml PCR管中加入1.2 μl逆轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物、sd H2O 9 μl、10 mmol/L dNTP 0.24 μl、10×PCR緩沖液1.2 μl、聚合酶0.12 μl、上游引物（20 μmol/L）0.12 μl、下游引物（20 μmol/L）0.12 μl，總反應(yīng)體系為12 μl。（4）PCR產(chǎn)物觀察。PCR產(chǎn)物經(jīng)40％丙烯酰胺凝膠電泳后，EB染色15 min，用凝膠成像系統(tǒng)進(jìn)行拍照及圖像分析，然后計(jì)算待測(cè)基因與內(nèi)標(biāo)磷酸甘油醛脫氫酶（glyceraldehyde phosphate dehydrogenase， GAPDH)吸光度的比值。PCR反應(yīng)擴(kuò)增參數(shù)如下：葡萄糖調(diào)節(jié)蛋白78（glucose regulated protein 78， GRP78），94 ℃ 5 min，94 ℃ 1 min，55 ℃ 1 min，72 ℃ 1 min，循環(huán)22圈，72 ℃ 5 min；凋亡促進(jìn)因子CCAAT/增強(qiáng)子結(jié)合蛋白同源蛋白（CCAAT/EBP homologous protein， CHOP），94 ℃ 5 min，94 ℃ 1 min，60 ℃ 1 min，72 ℃ 1 min，循環(huán)25圈，72 ℃ 5 min；GAPDH，94 ℃ 5 min，94 ℃ 40 s，58 ℃ 30 s，72 ℃ 40 s，循環(huán)28圈，72 ℃ 5 min。引物序列見表1。
表1 引物序列（略）
Table 1 Sequence of the primers
1.7 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 每組實(shí)驗(yàn)重復(fù)4次，圖像分析采用LabWorks 4.6專業(yè)圖像分析軟件。數(shù)據(jù)用SPSS 13.0軟件進(jìn)行分析，兩組間差異比較采用t檢驗(yàn)。
2 結(jié)果
2.1 LDH釋放試驗(yàn)檢測(cè)ZBPYR含藥血清對(duì)Tm刺激Neuro2a后LDH泄漏率的影響 各濃度含藥血清和10%空白血清組與對(duì)照組相比，LDH泄漏率差異沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，說明血清對(duì)Neuro2a細(xì)胞沒有毒性作用；Tm（5 μg/ml）組與對(duì)照組相比，LDH泄漏率明顯升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）；10％空白血清預(yù)處理組LDH泄漏率與Tm組相比，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；而各濃度ZBPYR含藥血清預(yù)處理組與Tm組相比，LDH泄漏率下降明顯，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。10％藥物血清預(yù)處理組與10％空白血清預(yù)處理組相比，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。見圖1。
2.2 RTPCR方法觀察ZBPYR含藥血清對(duì)Tm刺激Neuro2a后GRP78 mRNA表達(dá)的影響 各濃度含藥血清和10%空白血清組與對(duì)照組相比，GRP78 mRNA表達(dá)差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，說明血清對(duì)Neuro2a細(xì)胞GRP78 mRNA表達(dá)沒有影響；Tm（5 μg/ml）組與對(duì)照組相比，GRP78 mRNA表達(dá)明顯增強(qiáng)(P＜0.05)；而加入血清預(yù)處理1 h后再加入濃度為5 μg/ml Tm各組與Tm（5 μg/ml）組相比，GRP78 mRNA表達(dá)明顯下降(P＜0.05)，其中ZBPYR含藥血清預(yù)處理組GRP78 mRNA表達(dá)較空白血清預(yù)處理組GRP78 mRNA表達(dá)下降更加明顯(P＜0.05)。見圖2。
2.3 RTPCR方法觀察ZBPYR含藥血清對(duì)Tm刺激Neuro2a后CHOP mRNA表達(dá)的影響 各濃度含藥血清組與對(duì)照組相比，CHOP mRNA表達(dá)差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，說明血清對(duì)Neuro2a細(xì)胞CHOP mRNA表達(dá)沒有影響；Tm（5 μg/ml）組與對(duì)照組相比，CHOP mRNA表達(dá)增強(qiáng)（P＜0.05）；10％空白血清預(yù)處理組與Tm（5 μg/ml）組相比，CHOP mRNA表達(dá)差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；而各濃度ZBPYR含藥血清預(yù)處理組CHOP mRNA表達(dá)與Tm（5 μg/ml）組相比，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；10％藥物血清預(yù)處理組與10％空白血清預(yù)處理組相比，CHOP mRNA表達(dá)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。見圖2。
圖1 LDH檢測(cè)Tm刺激細(xì)胞后各組細(xì)胞LDH泄漏率（略）
Figure 1 LDH leakage from each group treated by Tm
**P＜0.01， vs normal control group; P＜0.05， P＜0.01， vs Tmtreated group; P＜0.05， vs 10％ control serumtreated group (n=4 for each group).
圖2 RTPCR法觀察Tm刺激各組細(xì)胞后GRP78和CHOP mRNA表達(dá)（略）
Figure 2 Expressions of GRP78 and CHOP mRNAs in different groups treated by Tm (RTPCR)
Results of RTPCR electrophoresis from each group and values of IOD from each group (n=4 for each group). *P＜0.05， vs normal control group; P＜0.05， vs Tmtreated group; P＜0.05， vs 10％ control serumtreated group.
2.4 LDH釋放試驗(yàn)檢測(cè)STS刺激Neuro2a后LDH泄漏率的變化 STS 0.1 μmol/L組與對(duì)照組比，LDH泄漏率升高（P＜0.01）；而加入15％空白血清預(yù)處理組與STS組相比，LDH泄漏率下降（P＜0.05）；15％ ZBPYR含藥血清預(yù)處理組與STS組相比，LDH泄漏率下降（P＜0.01）；15％ ZBPYR含藥血清預(yù)處理組與15％空白血清預(yù)處理組相比LDH泄漏率下降更加明顯（P＜0.05）。見圖3。
圖3 LDH檢測(cè)STS刺激細(xì)胞后各組細(xì)胞LDH泄漏率（略）
Figure 3 LDH leakage from each group treated by STS
**P＜0.01， vs normal control group; P＜0.05， P＜0.01， vs STStreated group; P＜0.05， vs 15％ control serumtreated group (n=4 for each group).
3 討論
ERS是細(xì)胞的一種應(yīng)激反應(yīng)過程，糖饑餓、鈣平衡紊亂、糖基化抑制和二硫鍵合成減少等情況下，內(nèi)質(zhì)網(wǎng)的微環(huán)境發(fā)生改變，蛋白質(zhì)的折疊受到影響，導(dǎo)致大量未折疊或錯(cuò)誤折疊的蛋白質(zhì)堆積于內(nèi)質(zhì)網(wǎng)內(nèi)，由此引起一系列以分子伴侶和折疊酶表達(dá)上調(diào)為標(biāo)志的應(yīng)答反應(yīng)，稱為未折疊蛋白反應(yīng)（unfolded protein response， UPR）。通過UPR細(xì)胞才能在應(yīng)激情況下存活。分子伴侶GRP78與凋亡促進(jìn)因子CHOP是ERS時(shí)表達(dá)增多的兩種分子，被看作是ERS的標(biāo)志，在ERS中起著不同的作用。其中GRP78能保護(hù)細(xì)胞，而CHOP則是促進(jìn)細(xì)胞凋亡。因此通過藥物干預(yù)后研究它們的表達(dá)情況可以進(jìn)一步了解藥物對(duì)ERS的作用。AD是一種常見的神經(jīng)退行性疾病，病理特征為淀粉樣蛋白的沉積、神經(jīng)原纖維纏結(jié)、tau蛋白異常磷酸化和區(qū)域選擇性神經(jīng)元死亡［1］。AD與基因突變有關(guān)，主要有編碼淀粉樣蛋白前體基因（amyloid protein precursor， APP）和早老素（presenilin， PS）基因，這些基因都與內(nèi)質(zhì)網(wǎng)有關(guān)。AD相關(guān)的早老素突變，誘導(dǎo)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激反應(yīng)并且通過改變APP的蛋白水解加工作用而部分地增強(qiáng)對(duì)應(yīng)激誘導(dǎo)的凋亡的易損性。PS1突變通過細(xì)胞表面有活性的鈣離子流入的直接減少，不依賴APP，并間接地通過APP處理作用和淀粉樣肽的產(chǎn)生增加內(nèi)質(zhì)網(wǎng)鈣離子釋放來解除對(duì)神經(jīng)元鈣離子穩(wěn)態(tài)的控制。這種鈣離子穩(wěn)態(tài)的干擾將改變APP的加工，過量生成β淀粉樣蛋白142(amyloid βprotein 142， Aβ142)，同時(shí)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)鈣失衡，激活鈣蛋白激酶，切割內(nèi)質(zhì)網(wǎng)膜上的caspase12，從而激活caspase12介導(dǎo)的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)特異性凋亡路徑，最終形成AD的病理變化［2］。除了鈣離子失調(diào)，PS突變下調(diào)UPR并增強(qiáng)對(duì)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激的易損性［3］。PS1突變還誘導(dǎo)了一個(gè)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)中與應(yīng)激介導(dǎo)的凋亡途徑有關(guān)的凋亡前因子CHOP的表達(dá)［4］。PS是γ分泌酶復(fù)合物的一部分，與β分泌酶一起，裂解APP產(chǎn)生Aβ，并且PS突變?cè)黾涌侫β和Aβ142的產(chǎn)生。Aβ能直接引發(fā)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)的鈣離子釋放并且誘導(dǎo)了內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激和神經(jīng)毒性［5］。因而，在AD中內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激是引發(fā)和調(diào)節(jié)神經(jīng)元死亡的一個(gè)主要事件。現(xiàn)有研究顯示在AD神經(jīng)元死亡中內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激凋亡途徑和線粒體損傷的凋亡途徑相互影響，起著調(diào)控凋亡級(jí)聯(lián)反應(yīng)的作用［6］。中醫(yī)認(rèn)為人體的生長(zhǎng)、發(fā)育和衰老與“腎”密切相關(guān)。“腎精虛衰”是衰老的主要原因。同時(shí)又認(rèn)為“脾胃為血?dú)怅庩栔佟保捌⑽讣群停淙藟郏黄⑽覆缓停淙素病保虼艘仓匾暦铕B(yǎng)脾胃精氣在延年中的作用［7］。老年癡呆發(fā)病于老年期。老年期脾胃氣衰，飲食減少，脾虛則化源不足，腦髓失養(yǎng)，神機(jī)失調(diào)而發(fā)為本病。因此脾虛是老年性癡呆的基本病機(jī)，脾的功能衰退在老年性癡呆發(fā)病過程中起著主導(dǎo)作用，并貫穿于全過程［8］。脾的生理功能是脾之陰陽共同作用的結(jié)果。脾陰是指存在于脾臟的陰液（包括血、津液和水谷精微等）和脾的物質(zhì)形態(tài)及其滋潤(rùn)濡養(yǎng)功能。由于脾與大腦關(guān)系密切，脾陰虧虛嚴(yán)重影響大腦的意識(shí)、學(xué)習(xí)、思維、記憶和情緒等功能，導(dǎo)致一系列與腦相關(guān)的精神意識(shí)病證如意識(shí)不清、學(xué)習(xí)記憶能力下降和情緒失常等。因此，滋補(bǔ)脾陰應(yīng)當(dāng)是防治老年癡呆的一個(gè)重要措施。滋補(bǔ)脾陰方藥由清代吳澄《不居集》中資成湯加味而成，以人參補(bǔ)脾益氣生津，山藥益胃補(bǔ)脾養(yǎng)陰，白芍養(yǎng)陰緩急，丹參活血養(yǎng)血益陰，茯苓健脾安神益智等，共奏健脾益陰之效。本組以往的研究顯示，滋補(bǔ)脾陰方藥能通過改善老齡大鼠腦細(xì)胞線粒體膜Na+K+ATP酶、Ca2+Mg2+ATP酶活性，調(diào)節(jié)膜磷脂代謝障礙和修飾膜的作用［9］，以及延緩興奮性氨基酸受體N甲基D門冬氨酸（NmethylDaspartic acid， NMDA）受體、γ氨基丁酸（gammaaminobutyric acid， GABA）受體染色陽性神經(jīng)元在衰老過程中喪失，同時(shí)抑制神經(jīng)膠質(zhì)纖維酸性蛋白（glial fibrillary acidic protein， GFAP）的表達(dá)，起到神經(jīng)保護(hù)、延緩腦衰老的作用［10］。本實(shí)驗(yàn)中Tm刺激Neuro2a細(xì)胞LDH釋放試驗(yàn)結(jié)果表明，在加入滋補(bǔ)脾陰方藥含藥血清預(yù)保護(hù)后，可以明顯降低Tm刺激細(xì)胞后的LDH泄漏率，結(jié)合RTPCR觀察到滋補(bǔ)脾陰方藥含藥血清預(yù)處理后，內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激標(biāo)志物GRP78及CHOP mRNA的表達(dá)受到抑制，兩種實(shí)驗(yàn)結(jié)果的同步性可以推斷滋補(bǔ)脾陰方藥具有抑制內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激的作用。STS刺激Neuro2a細(xì)胞LDH釋放試驗(yàn)結(jié)果表明，加入滋補(bǔ)脾陰方藥含藥血清預(yù)處理后，可以明顯降低STS刺激細(xì)胞后的LDH泄漏率（STS是線粒體凋亡途徑誘導(dǎo)劑）。因而表明滋補(bǔ)脾陰方藥同時(shí)具有保護(hù)線粒體損傷的作用。以上的研究結(jié)果為滋補(bǔ)脾陰方藥應(yīng)用于臨床防治AD提供了依據(jù)。AD是一種常見的神經(jīng)退行性病變，其發(fā)病機(jī)制復(fù)雜，目前尚無有效的治療手段，對(duì)社會(huì)和人們的生活造成嚴(yán)重的負(fù)擔(dān)。現(xiàn)有的研究表明，神經(jīng)元的凋亡在AD的發(fā)病過程中起著重要的作用。而內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激凋亡途徑和線粒體損傷的凋亡途徑已被證明在AD的發(fā)病過程中起著協(xié)同作用。我們的實(shí)驗(yàn)證明，滋補(bǔ)脾陰方藥對(duì)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激凋亡途徑和線粒體損傷的凋亡途徑具有雙重作用，因而有助于AD的防治，加之中藥治療有著毒副作用低、經(jīng)濟(jì)實(shí)惠的優(yōu)點(diǎn)，更易于為人們所接受。
【參考文獻(xiàn)】
1 Mattson MP. Pathways towards and away from Alzheimer's disease. Nature. 2004; 430(7000): 631639.
2 Nakagawa T， Zhu H， Morishima N， et al. Caspase12 mediates endoplasmic reticulumspecific apoptosis and cytotoxicity by amyloidbeta. Nature. 2000; 403(6765): 98103.
3 Yasuda Y， Kudo T， Katayama T， et al. FADlinked presenilin1 mutants impede translation regulation under ER stress. Biochem Biophys Res Commun. 2002; 296(2): 313318．
4 Milhavet O， Martindale JL， Camandola S， et al. Involvement of Gadd153 in the pathogenic action of presenilin1 mutations. J Neurochem. 2002; 83(3): 673681.
5 Suen KC， Lin KF， Elyaman W， et al. Reduction of calcium release from the endoplasmic reticulum could only provide partial neuroprotection against βamyloid peptide toxicity. J Neurochem. 2003; 87(6): 14131426.
6 Takuma K， Yan SS， Stern DM， et al. Mitochondrial dysfunction， endoplasmic reticulum stress， and apoptosis in Alzheimer’s disease. J Pharmacol Sci. 2005; 97(3): 312316．
7 Li ZP， Zhao WK， Xu PC， et al. Effects of recipes for replenishing qi and activating blood on senescence related gene expressions in the liver of aging rats. Zhong Xi Yi Jie He Xue Bao. 2005; 3(5): 370373. Chinese with abstract in English.
黎志萍， 趙偉康， 徐品初， 等. 益氣活血方藥對(duì)老年大鼠肝臟衰老相關(guān)基因表達(dá)的影響. 中西醫(yī)結(jié)合學(xué)報(bào). 2005; 3(5): 370373.
8 Zhao WY， Chen R. Applying treatment to senile dementia based on differentiation of spleen syndrome. Zhong Yi Yao Xue Kan. 2005; 23 (9): 16651666. Chinese.
趙文研， 陳榮. 從脾論治老年性癡呆癥. 中醫(yī)藥學(xué)刊. 2005; 23(9): 16651666.
9 Zhan LB， Xu F， Dong YK， et al. Effect of the prescription nourishing the Piyin (PNPY) on the brain mitochria menbrane ATPase activity of senile rats. Zhong Yao Yao Li Yu Lin Chuang. 2000; 16(1): 2425. Chinese with abstract in English.
同學(xué)聚會(huì)邀請(qǐng)函如何寫一
親愛的同學(xué)們：
光陰似箭，日月如梭，轉(zhuǎn)眼間我們已經(jīng)畢業(yè)xx年了。xx年光陰彈指一揮，人生滄海桑田。親愛的同學(xué)們：您是否會(huì)時(shí)常回憶起我們的青春歲月?您是否會(huì)時(shí)常懷念起同學(xué)間的純真情感?您是否會(huì)盼望能再次歡聚一堂，暢敘闊別之情?
你的心情現(xiàn)在好嗎?你的一切還算順利嗎?當(dāng)我們用自己的智慧和汗水，在創(chuàng)造生活和實(shí)現(xiàn)自我價(jià)值的過程中品味了人生的酸、甜、苦、辣之后都會(huì)發(fā)覺：讓我們最難以忘懷和割舍不掉的依舊是那份學(xué)生時(shí)代的同窗友情。不是嗎?多少寢室里的歡笑、多少操場(chǎng)上的打鬧、多少校園里的往事不是常常出現(xiàn)在你我的夢(mèng)里嗎?留言薄上的美好祝福、分手時(shí)的相互囑托、校門口的揮淚告別不也是常常閃現(xiàn)在你我的眼前嗎?如今我們還能再以忙碌為由，而去淡漠彼此間的同窗情誼嗎?往事難忘，溫馨如昨，依然常駐心頭;悲歡歲月，依稀如夢(mèng)，但愿你還記得我!我們和你一樣，多少次夢(mèng)里相聚，多少次心馳神往!
我們很想約你，約你去往事里走走，聽聽久違的聲音，看看久違的面孔，說說離別的思緒 盡管我們知道你很想抑制內(nèi)心的期盼與波瀾。但是這樣難得的歡聚，會(huì)因你的缺席而黯然失色，更令我們黯然神傷!就讓你我暫時(shí)拋開塵世的喧囂、掙脫身邊的煩惱，走到一起，盡情享受老同學(xué)相聚的溫馨讓心棲息，忘卻憂愁;說說真話，談?wù)動(dòng)亚?回首往事，暢想未來;交流感想，相互勉勵(lì) 相信除了欣喜和激動(dòng)，你還會(huì)有更多的收獲!
來吧，老同學(xué)!為了讓我們了卻一種遺憾xx年來未能謀面的遺憾，也許來了您會(huì)后悔，但不來卻是你終生難了的遺憾;來吧，老同學(xué)!為了讓我們尋求一種溫馨摯友久別再次歡聚的溫馨，也許來了您會(huì)更累，但不累怎能體驗(yàn)這難得的溫馨。來吧，老同學(xué)!來重溫曾經(jīng)的浪漫，展望精彩的明天，讓我們?cè)诶寺袛⑹龈髯缘墓适拢矓⒑笤偃プV寫明天的浪漫。來吧，老同學(xué)!薄酒一杯，卻品不盡沁人肺腑的甘純;淡飯兩口，也淡不了血濃于水的同學(xué)之交!我們聚到一起來，絕不是為了吃點(diǎn)喝點(diǎn)娛樂消遣，更不是為了胡吹海侃推銷風(fēng)光，而是為我們今后的親密來往鋪鋪路，為我們今后的感情溝通連連網(wǎng)
來吧，老同學(xué)!讓我們攜起手來，為融化世態(tài)炎涼干杯!
同學(xué)聚會(huì)邀請(qǐng)函如何寫二
xx師范大學(xué)xx系xx級(jí)畢業(yè)同學(xué)：
當(dāng)年同窗，今散四海;一別二十載，荏苒不惑年。老同學(xué)啊，現(xiàn)在你的心情好嗎?你的一切順利嗎?
美好的大學(xué)時(shí)光，恰似流光溢彩的畫卷，烙在我們的記憶深處;往事如夢(mèng)溫馨如昨，依然常駐心頭!因此我們?cè)趚x的同學(xué)始終堅(jiān)信：無論你回到故里，或遠(yuǎn)在他鄉(xiāng);無論你多么繁忙，或何等閑暇，你終究不會(huì)忘記那山、那水、那人、那屋于是，盡管有千山阻，萬水?dāng)r，都無法讓我們對(duì)你不惦記，無法讓我們對(duì)你不念想。然而，惦記、念想又有何用，因?yàn)槊恳淮蔚胗洝⒚恳换啬钕肟傔x在我們心中那塊最柔軟的地方堆砌明天將要來臨，你我相逢何期的感傷，以至于我們?cè)僖矡o法忍受，要用行動(dòng)來撫慰那彼此思念的愁腸。
悟已往之不諫，知來者之可追。今年適逢母校建立xx周年、同學(xué)畢業(yè)20周年，我們xx級(jí)同學(xué)會(huì)組委會(huì)鄭重向你發(fā)出邀請(qǐng)：來吧!親愛的同學(xué)，讓我們到桂林來!到母校來!讓我們走到一起來重溫我們過去走過的日子，盡情享受老同學(xué)相聚的溫馨探探師親，訪訪舊舍;說說心語，敘敘友情，在今天美麗的母校校園中回首往事、暢想未來;讓心棲息、忘卻憂慮;交流感悟、相互鼓舞
盼望您早作安排，如期赴約，并請(qǐng)與本小班召集人取得聯(lián)系。
順祝您及全家身體健康!萬事如意!預(yù)祝同學(xué)聚會(huì)圓滿成功!
交流會(huì)的邀請(qǐng)函范文一尊敬的同行們、朋友們：
您好!
時(shí)光飛逝，歲月如梭。轉(zhuǎn)眼間我們即將走過20xx年。在這一年，我們肩負(fù)重任，壓力重重;在這一年，我們時(shí)刻忙碌，迷失自我;在這一年，我們面臨挑戰(zhàn)，步履維艱;在這一年，我們倍感艱辛，祈盼收獲。跨過一年，你還在不知所措嗎?你還在艱難前行嗎?你還在獨(dú)自困惑嗎?不要再這樣!因?yàn)椋覀兒湍阍谝黄?
在此，我們誠(chéng)摯的邀請(qǐng)您參加我們20xx年度濰坊人力資源管理交流年會(huì)，加強(qiáng)自身專業(yè)技能，提高個(gè)人業(yè)務(wù)能力。傾聽他人的聲音，分享自己的心得，看看老朋友，結(jié)識(shí)新朋友。讓大家在一個(gè)輕松愉快的氛圍中，收獲知識(shí)，收獲樂趣、收獲明天，讓我們共同前行在HR的道路上，迎接美好的未來。
【主辦單位】 山東xxHR交流論壇
【協(xié)辦單位】 濰坊日月企業(yè)管理咨詢有限公司
【年會(huì)時(shí)間】 20xx年xx月xx日08:3015:00
【年會(huì)地點(diǎn)】 帝豪大酒店(于08:3009:00簽到)
【年會(huì)安排】 1、年度計(jì)劃的制訂
2、人力資源作業(yè)重點(diǎn)
3、20xx年HR發(fā)展探討
4、管理困惑解答
5、年會(huì)聚餐
【邀請(qǐng)對(duì)象】 企事業(yè)單位HR工作者(人數(shù)限制為100人)
【年會(huì)費(fèi)用】 100元/人 (因會(huì)議場(chǎng)地、會(huì)場(chǎng)服務(wù)、聚餐等均需費(fèi)用，請(qǐng)參會(huì)同行在簽到時(shí)繳納，謝謝!)
【注意事項(xiàng)】 請(qǐng)帶足名片，方便交流。
邀請(qǐng)人：XXX
XXXX年XX月XX日
交流會(huì)的邀請(qǐng)函范文二XX :
20xx年是個(gè)難忘的一年，承載了中華兒女太多的希望和淚水西南五省旱災(zāi)、江南暴雨洪澇災(zāi)害、4.14玉樹地震、大連泄油污染、8.8舟曲特大泥石流,對(duì)志愿者朋友及各NGO組織來說20xx年卻充滿了考驗(yàn)和磨難，災(zāi)難是不幸的，生命是無辜的，愛心卻是有情的!哪里有災(zāi)難哪里就有你們的身影，哪里有困難哪里就有愛心和希望，你們是最可愛的人，是最值得尊敬的人!今天，20xx年1月21日，我們匯聚一堂，相約20xx，共憶20xx!
【開啟記憶的封印，20xx公益在行動(dòng)】電子版年鑒合輯影像作品資料征集
過去的一年，我們偉大的志愿者及其NGO組織們?cè)谥腥A大地留下了太多的身影和故事，如果你有話要說，有故事要講，請(qǐng)您留下您的文字、照片，我們將統(tǒng)一編輯制作成電子年鑒合輯，為您也為所有有愛心的人們留下一份紀(jì)念
一、會(huì)議時(shí)間：
20xx年1月21日 13:3017:00
二、會(huì)議地點(diǎn)：
工人體育館北區(qū)地下一層報(bào)告廳
三、會(huì)議費(fèi)用：
免費(fèi);現(xiàn)場(chǎng)免費(fèi)提供飲料、茶點(diǎn);
現(xiàn)場(chǎng)設(shè)置募捐箱，所得善款將用于資助北京紅十字會(huì)希望大地助學(xué)項(xiàng)目
四、會(huì)議安排(詳細(xì)安排見當(dāng)日彩頁)：
1、13:30入場(chǎng)簽到、自由交流
2、14:0014:30 組織方致辭、參會(huì)組織致辭、志愿者代表致辭
3、14:3016:00 講述你的故事，20xx公益年鑒展
4、16:0017:00 20xx年度公益項(xiàng)目交流、黑暗中的太陽現(xiàn)場(chǎng)體驗(yàn)
5、17:00 抽獎(jiǎng)
五、參與對(duì)象：
公益慈善組織及其工作人員、志愿者以及有志于從事公益慈善事業(yè)有愛心的個(gè)人
六、參會(huì)報(bào)名及年鑒資料投送方式：
1、僅接受報(bào)名表報(bào)名，報(bào)名表下載地址(內(nèi)有聯(lián)系方式)：
2、提供公益年鑒資料的組織機(jī)構(gòu)或個(gè)人請(qǐng)隨報(bào)名表一并發(fā)送至報(bào)名表內(nèi)郵箱。
3、報(bào)名截止日期：20xx年1月20日
4、公益年鑒資料征集截止日期：20xx年1月16日
注1：需要在會(huì)議現(xiàn)場(chǎng)放置易拉寶、發(fā)放宣傳材料的組織機(jī)構(gòu)請(qǐng)?jiān)趫?bào)名時(shí)注釋并由我們統(tǒng)一規(guī)劃;
注2：需在現(xiàn)場(chǎng)單獨(dú)播放PPT的組織機(jī)構(gòu)請(qǐng)?jiān)趫?bào)名時(shí)注釋;
七、參與組織：
北京市紅十字基金會(huì)會(huì)希望大地項(xiàng)目、希望大地助學(xué)工作室、NPI(恩派)公益組織發(fā)展中心、創(chuàng)意之窗黑暗中的太陽項(xiàng)目組、綠色和平組織、北京市社會(huì)福利管理處、心平公益基金會(huì)、北京桂馨慈善基金會(huì)、騰訊公益、百度小桔燈、天涯公益(報(bào)名中)
媒體支持：央視國(guó)際、網(wǎng)易、搜狐、新浪網(wǎng)、京華時(shí)報(bào)、騰訊網(wǎng)、百度
技術(shù)支持：阿飛覓友團(tuán)影像資料組
八、年會(huì)現(xiàn)場(chǎng)志愿者招募
本次年會(huì)現(xiàn)場(chǎng)共需志愿者8名，分別為簽到處接待員2位;自助餐飲區(qū)1位;現(xiàn)場(chǎng)服務(wù)1位;主持人1位;PPT播放人員1位;平面設(shè)計(jì)人員1位;FLASH制作人員1位;歡迎各位志愿者朋友踴躍報(bào)名參加。
九、交通路線：
地 鐵：地鐵2號(hào)線到東四十條站，出東南C口，向東步行約10分鐘;地鐵10號(hào)線到團(tuán)結(jié)湖站，出東南C口，向西步行12分鐘
公交線路：______________
邀請(qǐng)人：XXX
XXXX年XX月XX日
交流會(huì)的邀請(qǐng)函范文三**同學(xué)：
您好!我是20xxxx世界園藝博覽會(huì)**(世園)，讓我們走在一起兩岸學(xué)生使者交流活動(dòng)組委會(huì)的工作人員，周為老師推薦說貴校學(xué)生才華橫溢，積極優(yōu)秀，因此組委會(huì)衷心邀請(qǐng)您和貴校學(xué)生參與此次兩岸學(xué)生使者交流活動(dòng)，讓貴校的學(xué)生們能夠代表貴校及貴地區(qū)同來自全國(guó)和世界各地的青年學(xué)子們進(jìn)行交流，傳播兩岸情誼。
本活動(dòng)是20xx年西安世界園藝博覽會(huì)(簡(jiǎn)稱世園會(huì))為傳遞世園會(huì)天人長(zhǎng)安，創(chuàng)意自然、城市與自然和諧共生等核心理念，將綠色引領(lǐng)時(shí)尚精神推廣至青年學(xué)子，將綠色、低碳、環(huán)保理念進(jìn)一步推廣給學(xué)生們而組織開展的。
參與形式非常簡(jiǎn)單，同學(xué)們只要登錄活動(dòng)官網(wǎng) xxxx上傳作品，即有機(jī)會(huì)成為兩岸交流使者，世園會(huì)將提供交流的全額經(jīng)費(fèi)支持，讓大學(xué)生能利用此平臺(tái)去臺(tái)灣、訪西安，與全國(guó)及國(guó)際留學(xué)生們交流。活動(dòng)不限制參與學(xué)生背景，并鼓勵(lì)所有學(xué)生能通過網(wǎng)站參與活動(dòng)。
網(wǎng)站針對(duì)學(xué)生，分為時(shí)尚好玩?zhèn)€性化的三個(gè)板塊：花語祝福，花與生活，花于潮流，任選一種參與即可。參與方式活動(dòng)快速簡(jiǎn)單，三分鐘內(nèi)便能完成。這是一個(gè)發(fā)揮創(chuàng)意，展示當(dāng)代大學(xué)生才華的平臺(tái)。參加活動(dòng)不僅有機(jī)會(huì)獲得兩岸交流，其作品還有機(jī)會(huì)收錄入科學(xué)松鼠會(huì)與頭腦風(fēng)暴主持人袁岳先生明年將出版的《身邊的植物》一書，優(yōu)秀T-shirt作品更將成為兩岸交流使者的統(tǒng)一服裝。
非常希望您能參與到我們的活動(dòng)中來，同時(shí)也希望能幫忙在貴社團(tuán)及學(xué)校對(duì)本次活動(dòng)給予支持，在學(xué)生中對(duì)是緣(世園)讓我們走到一起兩岸學(xué)生使者交流活動(dòng)進(jìn)行宣傳，鼓勵(lì)更多學(xué)生參與。本次活動(dòng)介紹請(qǐng)見附件，如需要宣傳海報(bào)或紀(jì)念品，歡迎隨時(shí)聯(lián)系活動(dòng)組委會(huì)。
