引言：易發(fā)表網(wǎng)憑借豐富的文秘實(shí)踐，為您精心挑選了九篇保險(xiǎn)意義和感悟范例。如需獲取更多原創(chuàng)內(nèi)容，可隨時(shí)聯(lián)系我們的客服老師。

第1篇

論文摘要 總結(jié)了蘇云金桿菌的發(fā)現(xiàn)及殺蟲機(jī)理，對(duì)蘇云金桿菌的研究現(xiàn)狀、研究中存在的問題及解決的思路進(jìn)行了闡述，并對(duì)蘇云金桿菌的應(yīng)用前景進(jìn)行了展望。

新型微生物農(nóng)藥作為無公害農(nóng)林生產(chǎn)資料，在未來的農(nóng)作物病蟲害防治方面將有巨大的市場(chǎng)需求。進(jìn)一步加快微生物農(nóng)藥的研制、產(chǎn)業(yè)化和推廣應(yīng)用進(jìn)程，降低農(nóng)藥在農(nóng)副產(chǎn)品中的殘留和對(duì)農(nóng)田生態(tài)環(huán)境的污染，實(shí)現(xiàn)農(nóng)作物重大病蟲害的可持續(xù)控制，必將產(chǎn)生巨大的社會(huì)、經(jīng)濟(jì)和生態(tài)效益。

1蘇云金芽孢桿菌(Bt)的發(fā)現(xiàn)及殺蟲機(jī)理

1.1蘇云金芽孢桿菌(Bt)的發(fā)現(xiàn)

1901年日本學(xué)者石度繁從患猝倒病的家蠶幼蟲中分離到第1個(gè)產(chǎn)生晶體的芽孢桿菌。10年后Berliner從德國蘇云金地方一家面粉廠染病的地中海粉螟中分離到一個(gè)相似的菌株，并正式定名為蘇云金芽孢桿菌(Bt)。4年后，一個(gè)叫克林諾的科學(xué)家發(fā)現(xiàn)，在這種細(xì)菌的細(xì)胞中可以形成方形或菱形的晶體，可惜這個(gè)發(fā)現(xiàn)并未被重視。直到40年后的1953年，一位叫漢納的生物學(xué)家證明了這種晶體是有毒的蛋白質(zhì)晶體，才揭示了粉螟死亡的原因。在1920~1930年間，Bt作為微生物殺蟲劑主要用來防治玉米螟。1938年第1個(gè)商品制劑Sporeine在法國問世，從此拉開了生物殺蟲劑的序幕。以后相繼發(fā)現(xiàn)了對(duì)鞘翅目、螨類、同翅目、膜翅目、直翅目昆蟲、動(dòng)植物寄生線蟲、鞭毛蟲、變形蟲、吸蟲、絳蟲有毒殺作用的Bt菌株。

進(jìn)一步的研究發(fā)現(xiàn)，Bt是革蘭氏陽性菌，另外，它可寄生在一些蛾類和蝶類的幼蟲上，甚至是植物表面。

蘇云金芽孢桿菌分泌出的由Cry基因編碼的、有殺蟲活性的δ-毒素(或被稱為殺蟲晶體蛋白)的蛋白結(jié)晶構(gòu)成了內(nèi)孢子。Cry蛋白對(duì)鱗翅目(如蛾與蝶)、雙翅目(如蒼蠅、蚊子)和鞘翅目(甲蟲)有很大殺傷力。因此，可將蘇云金芽孢桿菌發(fā)酵生產(chǎn)制成高效生物殺蟲劑，或用Cry基因制成防蟲害的轉(zhuǎn)基因產(chǎn)品。

1.2蘇云金芽孢桿菌(Bt)的殺蟲機(jī)理

蘇云金芽孢桿菌(Bt)之所以能夠殺蟲，是由于它們的細(xì)胞內(nèi)存在著一種有毒的蛋白質(zhì)，叫做伴孢晶體，昆蟲吞食后就會(huì)中毒而死。而這種活細(xì)胞及伴孢晶體對(duì)環(huán)境無毒無害。因?yàn)樵趧?dòng)物的胃腸道內(nèi)，酸性環(huán)境下蛋白質(zhì)晶體不能溶解，從而對(duì)人畜無害。所以它是一種高效安全的生物殺蟲劑，可用來殺滅多種農(nóng)作物害蟲。蘇云金芽孢桿菌(Bt)殺蟲機(jī)理主要是:昆蟲取食蘇云金芽孢桿菌后，桿菌在其胃腸道內(nèi)產(chǎn)生蛋白質(zhì)晶體內(nèi)毒素(δ-內(nèi)毒素)、熱穩(wěn)定毒素(β-外毒素)、葉蜂毒素(α-外毒素)及Bt-γ外毒素。這些毒素能侵蝕昆蟲腸道細(xì)胞，破壞腸道內(nèi)膜，并進(jìn)入血淋巴組織，使害蟲因饑餓而出現(xiàn)敗血癥最后死亡。蘇云金芽孢桿菌的防治對(duì)象是鱗翅目、膜翅目、雙翅目、鞘翅目等多種害蟲，其藥性的持效期可達(dá)7~10d左右。需要特別注意的是:蘇云金芽孢桿菌(Bt)及其制劑對(duì)蠶具有很高的毒性，桑園必須禁用。另外，勿與堿性殺菌劑混合施用，晴天的傍晚或陰天施藥效果最佳。

2蘇云金芽孢桿菌(Bt)的研究現(xiàn)狀

2.1蘇云金芽孢桿菌(Bt)的研究主要集中在分子水平上

過去Bt是作為一種制劑應(yīng)用于農(nóng)林害蟲的防治，隨著生物技術(shù)的發(fā)展，現(xiàn)在已對(duì)蘇云金芽孢桿菌的殺蟲蛋白質(zhì)和相關(guān)基因作了深入而透徹的研究，也就是說在基因的水平上對(duì)它有了更多的了解。研究發(fā)現(xiàn)，在其體內(nèi)具有一種Cry基因，正是這種基因編碼產(chǎn)生的蛋白質(zhì)對(duì)上述昆蟲具有極大的毒性，所以這種基因的結(jié)構(gòu)和特性就影響到它本身，也影響到它的殺蟲范圍。當(dāng)然某一基因的長(zhǎng)期應(yīng)用會(huì)刺激昆蟲產(chǎn)生抗體。因此，現(xiàn)在對(duì)蘇云金芽孢桿菌的研究更多地集中在分子水平上。 轉(zhuǎn)貼于

2.2國內(nèi)主要研究成果

中國現(xiàn)在在蘇云金芽孢桿菌殺蟲劑的商品化生產(chǎn)和防治農(nóng)林害蟲的系統(tǒng)工作方面，取得的主要成果有:研制和生產(chǎn)質(zhì)優(yōu)價(jià)廉的Bt懸浮劑和高效價(jià)的粉劑，實(shí)現(xiàn)了中國Bt殺蟲劑的商品化生產(chǎn);建立了以生物測(cè)定為基礎(chǔ)的產(chǎn)品毒力效價(jià)測(cè)定的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)化技術(shù)化系統(tǒng);研究了助劑及貯存條件對(duì)Bt的影響，為助劑的篩選和有效存貯提供了可靠的依據(jù);大規(guī)模推廣應(yīng)用Bt殺蟲劑以防治棉、糧、果疏及林業(yè)害蟲，并取得了良好的效果。該研究中研制和生產(chǎn)的適合中國的優(yōu)質(zhì)廉價(jià)的Bt懸浮劑，已在農(nóng)林害蟲防治中得到廣泛應(yīng)用;Bt粉劑的毒力效價(jià)和防蟲效果，已達(dá)到國際同類產(chǎn)品先進(jìn)水平;以棉鈴蟲和小菜蛾為標(biāo)準(zhǔn)昆蟲，建立了中國Bt產(chǎn)品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)化測(cè)定技術(shù)系統(tǒng)，為國產(chǎn)Bt殺蟲劑的行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)的建立奠定了良好基礎(chǔ)，為與Bt殺蟲劑國際質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)接軌提供了保障。

3研究中存在的問題及解決的思路

3.1主要問題

蘇菌基因的表達(dá)會(huì)發(fā)生變化。例如，如果溫度不理想，就可能降低毒素的產(chǎn)生，使植物易受侵蝕。更加嚴(yán)重的是，試驗(yàn)證明毒素減少的晚季植物會(huì)形成啟動(dòng)子的DNA甲基化。 另外，毒素的持續(xù)使用會(huì)使普通害蟲演化為抗性蟲。試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，小菜蛾對(duì)蘇菌毒素的噴霧形式就已產(chǎn)生抗性。

蘇菌毒素的運(yùn)用還有一些可能的危險(xiǎn)，如:如果轉(zhuǎn)基因玉米與變異野草雜交，蘇菌基因的抗性就有可能因食物鏈來到食草動(dòng)物群落中，蜂群衰竭失調(diào)(CCD)，也可能跟蘇菌轉(zhuǎn)基因作物有關(guān)。

3.2解決的思路

(1)有抗植株與無抗植株間種。減少害蟲抗藥性的一個(gè)有效方法就是將有抗植株與無抗植株間種，目的是減少抗性基因頻率，犧牲少量無抗植株保證產(chǎn)量。美國和歐洲的某些區(qū)域已經(jīng)立法要求使用上述方法種植。這種方法的理論依據(jù)是假設(shè)抗性基因是隱性的。依目前來看，這種方法應(yīng)該可以延遲害蟲對(duì)蘇菌的抗性;另一方面，假如產(chǎn)生了多種蘇菌毒素的農(nóng)作物可以完全滅絕害蟲，抗性基因的存在也就不可能了。不過，至今為止，害蟲滅絕的情況還未出現(xiàn)。

(2)通過接合構(gòu)建新菌株。蘇云金芽孢桿菌菌株的特定質(zhì)粒可以自行轉(zhuǎn)移，這些質(zhì)粒可以通過接合來構(gòu)建新菌株。例如，科羅拉多馬鈴薯甲蟲(鞘翅目)是北美最具破壞性的馬鈴薯害蟲，歐洲玉米螟和土豆塊莖蠕蟲，對(duì)馬鈴薯也有很大的破壞作用。從自然界中分離的蘇云金芽孢桿菌菌株，沒有一個(gè)菌株對(duì)所有這些昆蟲都具毒性。然而，通過質(zhì)粒轉(zhuǎn)移雜交，現(xiàn)在已經(jīng)構(gòu)建出對(duì)3種害蟲都有效的新菌株，田間試驗(yàn)表明，該菌株作為廣譜的馬鈴薯殺蟲劑很有前途。

4蘇云金芽孢桿菌(Bt)的應(yīng)用前景

微生物農(nóng)藥是21世紀(jì)農(nóng)藥工業(yè)的新產(chǎn)業(yè)，代表著植物保護(hù)的方向，其最大的優(yōu)勢(shì)在于能克服化學(xué)農(nóng)藥對(duì)生態(tài)環(huán)境的污染，并減少農(nóng)藥在農(nóng)副產(chǎn)品中的殘留量。同時(shí)，在推廣微生物農(nóng)藥應(yīng)用過程中，農(nóng)副產(chǎn)品的品質(zhì)和價(jià)格將大幅度上升，有力地促進(jìn)農(nóng)村經(jīng)濟(jì)增長(zhǎng)和農(nóng)民增收，社會(huì)效益不可估量。

我國是一個(gè)農(nóng)業(yè)大國，農(nóng)業(yè)的發(fā)展事關(guān)重大。為了更好地落實(shí)科學(xué)發(fā)展觀，建立環(huán)保型、節(jié)約型農(nóng)業(yè)，微生物農(nóng)藥將為農(nóng)產(chǎn)品優(yōu)質(zhì)安全生產(chǎn)和降低有毒物質(zhì)殘留提供技術(shù)和物質(zhì)保證。微生物農(nóng)藥研究與發(fā)展，將有效地實(shí)現(xiàn)農(nóng)產(chǎn)品的優(yōu)質(zhì)安全生產(chǎn)，提升農(nóng)產(chǎn)品的經(jīng)濟(jì)附加值，擴(kuò)大我國農(nóng)副產(chǎn)品外銷市場(chǎng)，推進(jìn)綠色產(chǎn)業(yè)的發(fā)展。所有這些均對(duì)發(fā)展農(nóng)村經(jīng)濟(jì)、增加農(nóng)民收入、促進(jìn)農(nóng)村繁榮具有重要的推進(jìn)作用。

參考文獻(xiàn)

[1] 喻子牛.蘇云金芽孢桿菌[M].北京:科學(xué)出版社，1990.

[2] 蔡鴻嬌，侯有明，尤民生.應(yīng)用Bt控制鞘翅目害蟲的研究現(xiàn)狀[J].武夷科學(xué)，2002(1):259-265.

[3] 吳繼星.蘇云金芽孢桿菌的抗藥性研究[J].微生物學(xué)雜志，1992(1):60-61.

[4] 謝道昕，范運(yùn)六.蘇云金芽孢桿菌殺蟲晶體蛋白基因?qū)朊藁ǐ@得轉(zhuǎn)基因棉株[J].中國科學(xué)(B輯)，1991(4):367-363.

[5] 袁志明，蔡全信，Andrup L，等.蘇云金芽胞桿菌腸毒素基因的PCR檢測(cè)[J].微生物學(xué)報(bào)，2001，41(2):14.

第2篇

【關(guān)鍵詞】 反義 寡核苷酸 乳腺癌 HER2 mRNA 紫杉醇

0 引言

乳腺癌的化學(xué)治療近年來有了長(zhǎng)足的進(jìn)展，然而，經(jīng)多線治療仍復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移的晚期患者的治療，仍然十分棘手。探索包括生物靶向治療在內(nèi)的新療法已成為近年研究的熱點(diǎn)之一。

本研究室的前期研究表明，以HER2 mRNA為靶點(diǎn)的特異性硫代反義寡核苷酸，可以抑制HER2過表達(dá)乳腺癌細(xì)胞株增殖活性[1]。本研究擬對(duì)既往合成的反義寡核苷酸HA6722 單用或與紫杉醇聯(lián)用時(shí)的抗乳腺癌活性進(jìn)行研究，試圖探索乳腺癌治療新方法。

1 材料與方法

1.1 細(xì)胞系及培養(yǎng)

本研究采用的細(xì)胞株有：MDAMB453（HER2過表達(dá)），細(xì)胞培養(yǎng)所需的培養(yǎng)基為L(zhǎng)15（Gibco， BRL），內(nèi)含10%的胎牛血清（FCS，Hyclone），置37℃、不含CO2的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；MDAMB231（HER2低表達(dá)）的體外培養(yǎng)采用RPMI1640（Gibco， BRL）培養(yǎng)基，內(nèi)含10%的胎牛血清（FCS，Hyclone），置37℃、含體積分?jǐn)?shù)為5%的CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)傳代。當(dāng)細(xì)胞生長(zhǎng)至80%～85%融合時(shí)用0.25%胰蛋白酶消化，傳代和收集細(xì)胞。

1.2 硫代反義寡核苷酸的合成及體外脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染

反義寡核苷酸的靶向HER2 mRNA反義寡核苷酸HA6722序列為含20個(gè)核苷酸的寡聚核苷酸，其命名原則及合成見文獻(xiàn)報(bào)道[2]。全程硫代修飾，由北京賽百盛基因技術(shù)有限公司合成。序列如下：HA6722：5′CAG CAG CCG AGC CAG CCC GA3′

瓊脂糖凝膠電泳結(jié)果表明反義寡核苷酸純度符合要求。反義寡核苷酸以無血清無抗生素的L15或RPMI1640培養(yǎng)基溶解濃度為50μmol·L-1的溶液，過濾除菌，-20℃儲(chǔ)存，臨用時(shí)稀釋至所需濃度。

反義寡核苷酸體外脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染按Invitrogen， Gibco BRL公司脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染說明書所述方法進(jìn)行。當(dāng)培養(yǎng)細(xì)胞達(dá)到65%～70%融合時(shí)，進(jìn)行轉(zhuǎn)染，具體方法見文獻(xiàn)[3]。

1.3 紫杉醇 由海南海藥公司提供，30mg/支，臨用時(shí)以無菌生理鹽水稀釋成所需濃度。

1.4 噻唑藍(lán)（methyl thiazolyl tetrazolium， MTT）法檢測(cè)細(xì)胞活度 取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的上述細(xì)胞，以不同數(shù)量接種96孔培養(yǎng)板（Costar，USA），接種數(shù)量分別為：MDAMB453 5×104/孔、 MDAMB231 2×104孔。實(shí)驗(yàn)組及對(duì)照組細(xì)胞培養(yǎng)均設(shè)三個(gè)平行孔。待細(xì)胞生長(zhǎng)至65%～70%融合時(shí)，用脂質(zhì)體2 000將不同濃度的HA6722轉(zhuǎn)染細(xì)胞4～6h，再加入同摩爾濃度的紫杉醇，隨后繼續(xù)培養(yǎng)24～72h，傾去培養(yǎng)液，加新鮮配置的MTT溶液（0.5mg/ml）200μl，繼續(xù)孵育4h，吸去MTT溶液，每孔加200μl DMSO， 輕輕震蕩20～30min，酶聯(lián)儀測(cè)定光吸收值（OD值）。

1.5 細(xì)胞凋亡（apoptosis）檢測(cè) 凋亡試劑盒購自北京中山生物技術(shù)有限公司。以100nmol·L-1的HA6722及紫杉醇分別單獨(dú)處理MDAMB453細(xì)胞12h，以及用50nmol·L-1的HA6722和相同濃度的紫杉醇先后作用MDAMB453乳腺癌細(xì)胞6h，收集經(jīng)紫杉醇及HA6722單藥或聯(lián)合作用后的MDAMB453乳腺癌細(xì)胞，離心涂片，按操作說明檢測(cè)細(xì)胞凋亡。細(xì)胞核內(nèi)出現(xiàn)棕褐色沉淀為陽性，反之為陰性。凋亡指數(shù)（AI）=（凋亡細(xì)胞數(shù)/計(jì)數(shù)總細(xì)胞數(shù)）×100%。

1.6 反義藥物及紫杉醇的療效評(píng)價(jià)

對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的MDAMB453細(xì)胞及MDAMB231細(xì)胞經(jīng)系列濃度的HA6722及紫杉醇單用或聯(lián)合作用后， MTT法測(cè)定OD值。紫杉醇單用時(shí)的系列終濃度為1、4、16、64、250及1 000nmol·L-1，而HA6722單用時(shí)的系列終濃度為12.8，32，80，200，500，1 250nmol·L-1；聯(lián)合應(yīng)用時(shí)二者以等摩爾濃度混合，系列濃度依次為6.4、16、40、100、250及625nmol·L-1，反應(yīng)終體積為200μl。生存分?jǐn)?shù)f按下述公式計(jì)算：f=ODtreat/ODcontrol(1)

聯(lián)合方案的療效評(píng)價(jià)按有關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行[4，5]，即以log(1/f1)對(duì)log（藥物濃度）作圖，并行線性擬合，得曲線的x軸截距即為log（IC50），和直線斜率m，利用下述公式計(jì)算產(chǎn)生效應(yīng)f時(shí)的單藥及聯(lián)合時(shí)的藥物濃度：Dosef=DoseIC50[(1/f)1]1/m (2)

由于聯(lián)合方案采用的是固定摩爾濃度比，因此產(chǎn)生效應(yīng)f的藥物濃度可分解為聯(lián)合藥物的濃度（D）1和（D）2，對(duì)于產(chǎn)生任一效應(yīng)f時(shí)的藥物聯(lián)合指數(shù)(combine index，CI)可以下列公式算出：

CI＝（D）1（Df）1＋（D）2（Df）2＋α（D）1（D）2（Df）1（Df）2(3)

式中（D）1和（D）2分別代表聯(lián)合用藥產(chǎn)生效應(yīng)f時(shí)的濃度，而（Df）1和（Df）2分別代表藥物單用時(shí)產(chǎn)生效應(yīng)f時(shí)的濃度；根據(jù)推測(cè)兩藥不排斥或相互排斥的可能，α取值1或0；CI反映二藥聯(lián)合的相互作用，大于1表示拮抗，等于1表示相加，小于1表示協(xié)同。全部試驗(yàn)均進(jìn)行3次以上重復(fù)。

1.7 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

采用SPSS10.0統(tǒng)計(jì)分析軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理，實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)以±s表示，均數(shù)比較采用Student’s t檢驗(yàn)和方差分析F檢驗(yàn)（One Way Anova）。

2 結(jié)果

2.1 HA6722及紫杉醇單用時(shí)對(duì)兩種乳腺癌細(xì)胞的抑制作用

在1、4、16、64、250及1 000nmol·L-1的終濃度下，紫杉醇對(duì)兩種乳腺癌細(xì)胞的生長(zhǎng)均顯示劑量依賴性抑制作用，其抑制的IC50值分別為19.4±4.1nmol·L-1及23.6±5.7nmol·L-1，見圖1A；而在12.8、32、80、200、500、1 250nmol·L-1的系列濃度作用下，HA6722對(duì)兩種不同HER2表達(dá)水平的乳腺癌細(xì)胞的體外生長(zhǎng)的影響迥然不同，對(duì)HER2過表達(dá)的MDAMB453細(xì)胞呈現(xiàn)明顯的劑量依賴性抑制，而對(duì)HER2低表達(dá)的MDAMB231細(xì)胞則幾乎沒有抑制， IC50分別為47.6±7.9nmol·L-1和731.8±14.3nmol·L-1(n=3，P＜0.01，見圖1B。

2.2 HA6722及紫杉醇乳劑合用對(duì)MDAMB453乳腺癌細(xì)胞的抑制作用

從上述初步結(jié)果可以看到，12.8nmol·L-1濃度的HA6722對(duì)MDAMB453細(xì)胞的抑制率只有4.7%，因而該濃度被作為非治療濃度用于增強(qiáng)紫杉醇的藥理作用研究，結(jié)果表明，由于該濃度HA6722的加入，紫杉醇對(duì)MDAMB453細(xì)胞的抑制作用增強(qiáng)，IC50值由19.4±4.1nmol·L-1降至13.6±5.2nmol·L-1（n= 3，P＜0.05）。

等摩爾濃度的HA6722與紫杉醇合用的研究表明，經(jīng)6.4、16、40、100、250及625nmol·L-1的兩種藥物共同作用，MDAMB453細(xì)胞增殖呈現(xiàn)更為明顯的抑制，見圖2 A、B、C。在IC50濃度下的聯(lián)合指數(shù)CI為0.85±0.16(n=3)，在研究涉及的全部藥物濃度范圍內(nèi)，兩種藥物的聯(lián)合指數(shù)波動(dòng)在（0.85±0.11）～（0.87±0.27）之間，見圖2D。

轉(zhuǎn)貼于

為了澄清HA6722與紫杉醇協(xié)同抗腫瘤作用是否具有細(xì)胞選擇性，對(duì)HER2低表達(dá)的乳腺癌細(xì)胞株MDAMB231細(xì)胞也進(jìn)行了同樣的研究，結(jié)果表明，等摩爾濃度的二種藥物合用對(duì)該細(xì)胞株的聯(lián)合指數(shù)在所檢測(cè)的藥物濃度下，波動(dòng)在（1.13±0.21）～（1.19±0.24）之間，見圖3。

2.3 HA6722及紫杉醇乳劑合用對(duì)MDAMB453乳腺癌細(xì)胞凋亡的影響

經(jīng)100nmol·L-1的HA6722及紫杉醇分別單獨(dú)處理或以50nmol·L-1的HA6722和相同濃度的紫杉醇先后作用MDAMB453細(xì)胞后，TUNEL法對(duì)細(xì)胞凋亡的檢測(cè)顯示，HA6722與紫杉醇合用增強(qiáng)了細(xì)胞的凋亡作用（n=3，P＜0.05），見表1。

3 討論

業(yè)已證明，原癌基因HER2過表達(dá)是一個(gè)獨(dú)立的、不良的預(yù)后指標(biāo)，將導(dǎo)致乳腺癌患者對(duì)某些化療方案耐藥[6]，生存期縮短[7]。

圖1 紫杉醇及反義寡核苷酸HA6722單用時(shí)對(duì)兩種乳腺癌細(xì)胞株，MDAMB453及MDAMB231細(xì)胞體外增殖的影響（略）

圖3 等摩爾濃度的HA6722與紫杉醇合用時(shí)對(duì)MDAMB231聯(lián)合指數(shù)隨生存分?jǐn)?shù)的變化曲線（略）

圖2 紫杉醇和HA6722單用或聯(lián)合時(shí)對(duì)MDAMB453細(xì)胞增殖的影響（略）

表1 HA6722與紫杉醇單用或聯(lián)合應(yīng)用對(duì)MDAMB453細(xì)胞凋亡的影響（略）

MDAMB453組*P

紫杉醇是一種新型的抗微管集聚劑，是當(dāng)前乳腺癌治療中療效較高的藥物之一。然而，由于絕大部分細(xì)胞毒藥物存在劑量限制性毒副作用（DLTs），因而單用化療藥物不但無法治愈腫瘤，而且還會(huì)產(chǎn)生嚴(yán)重的毒副作用。事實(shí)上，一度被認(rèn)為乳腺癌根治希望所在的大劑量化療（HDCT）加干細(xì)胞支持療法也并沒有達(dá)到根治甚至是有效改善乳腺癌患者預(yù)后的目的[8]。

生物靶向治療近年逐漸成為研究的焦點(diǎn)，以bcl2等基因?yàn)榘悬c(diǎn)的反義藥物G3139已在體外及體內(nèi)研究中均顯示出明確的抗腫瘤作用，并可增強(qiáng)細(xì)胞毒藥物的抗腫瘤效果[9，10]。如采用反義藥物與細(xì)胞毒藥物聯(lián)合的辦法，能在不影響抗腫瘤效果的前提下，降低細(xì)胞毒藥物的用量，減少或避免毒性反應(yīng)的發(fā)生，不失為一種兩全的策略。本研究對(duì)反義藥物HA6722與細(xì)胞毒藥物紫杉醇對(duì)乳腺癌細(xì)胞體外增殖進(jìn)行了相關(guān)研究。結(jié)果表明， 以低劑量（非治療劑量）的HA6722與紫杉醇聯(lián)合，可以引起紫杉醇抗MDAMB453細(xì)胞增殖活性的明顯增強(qiáng)，IC50值由19.4±4.1nmol·L-1降至13.6±5.2nmol·L-1（n=3，P＜0.05）；而等摩爾濃度的上述兩種藥物聯(lián)合，其對(duì)MDAMB453細(xì)胞的抗增殖作用較之兩倍濃度的單藥作用更強(qiáng)。在IC50濃度下兩藥的聯(lián)合指數(shù)CI為0.85±0.16(n=3)，表明二者合用對(duì)HER2過表達(dá)的MDAMB453細(xì)胞的抑制作用是協(xié)同的。

本研究對(duì)兩種藥物合用時(shí)對(duì)乳腺癌細(xì)胞的凋亡過程進(jìn)行了觀察。結(jié)果表明，合用時(shí)MDAMB453細(xì)胞凋亡率明顯強(qiáng)于二藥之一的單獨(dú)應(yīng)用，與文獻(xiàn)報(bào)告一致[11，12]。

本研究尚對(duì)另外一種HER2正常表達(dá)細(xì)胞MDAMB231細(xì)胞進(jìn)行了研究，結(jié)果表明，HA6722和紫杉醇合用并未引起抗腫瘤活性的增強(qiáng)，進(jìn)一步說明，這兩種藥物的協(xié)同抗腫瘤作用，是以乳腺癌細(xì)胞的HER2基因乃至受體過表達(dá)為前提，其詳細(xì)機(jī)制有待于進(jìn)一步研究。

【參考文獻(xiàn)】

［1］ 楊栓平，宋海峰，宋三泰，等. 靶向HER2 mRNA反義寡核苷酸對(duì)SKBR3乳腺癌細(xì)胞Caspase3蛋白表達(dá)的影響［J］. 中國藥理學(xué)通報(bào)， 2003， 19（5）：505507.

[2] Yang SP， Song ST， Tang ZM， et al. Optimization of antisense drug design against conservative local motif in simulant secondary structures of HER2 mRNA and QSAR analysis［J］. Acta Pharmacol Sin， 2003， 24(9): 897902.

[3] 孫君重， 宋海峰， 宋三泰， 等. 靶向HER2 mRNA反義硫代寡核苷酸體外抗乳腺癌活性研究［J］. 腫瘤防治研究， 2005， 32（12）：745748.

[4] Quantitative analysis of doseeffect relationships: the combined effects of multiple drugs or enzyme inhibitors［J］. Adv Enzyme Regul， 1984， 22: 2755.

[5] Xu JM， Azzariti A， Severino M， et al. Characterization of sequencedependent synergy between ZD1839 (“Iressa”) and oxaliplatin［J］. Biochem Pharmacol， 2003， 66(4): 551563.

[6] Del Mastro L， Bruzzi P， Nicolo G， et al. HER2 expression and efficacy of dosedense anthracyclinecontaining adjuvant chemotherapy in breast cancer patients［J］. Br J Cancer， 2005， 93(1): 714.

[7] Ross JS， Fletcher JA. The HER2/neu oncogene: prognostic factor， predictive factor and target for therapy［J］. Semin Cancer Biol， 1999， 9(2): 125138.

[8] 孫君重，江澤飛，宋三泰. 對(duì)乳腺癌高劑量化療的再認(rèn)識(shí)［J］. 國外醫(yī)學(xué)腫瘤學(xué)分冊(cè)， 2003， 30（2）：119122.

[9] Rudin CM， Kozloff M， Hoffman PC， et al. Phase I study of G3139， a bcl2 antisense oligonucleotide， combined with carboplatin and etoposide in patients with smallcell lung cancer［J］. J Clin Oncol， 2004， 22(6): 11101117.

[10]Rait AS， Pirollo KF， Xiang L， et al. Tumortargeting， systemically delivered antisense HER2 chemosensitizes human breast cancer xenografts irrespective of HER2 levels［J］. Mol Med， 2002， 8(8): 475486.

第3篇

【關(guān)鍵詞】四氫生物蝶呤；心肌缺血再灌注損傷； 三磷酸腺苷敏感性鉀通道；

一氧化氮合酶

Role of the tetrahydrobiopterin in Myocardial preconditioning: Possible Involvement of Mitochondrial KATP Channels and Nitric Oxide Synthase

ZHONG Biao1, ZHONG Huan-qing2, CHEN Hai-sheng2.

1.Department of Thoracic and Cardiovascular Surgery, Huizhou Municipal Central Hospital, Huizhou, Guangdong Province, 516000, China

2.Department of Cardiovascular Surgery, Gaozhou People’s Hospital, Maoming, Guangdong Province, 525200, China

【Abstract】ObjectiveTo study the effect of tetrahydrobiopterin(BH4),5-hydroxydecanoate (5-HD) and Nω- nitro-L-arginine methyl ester(L-NAME) on langendorff rabbit heart model. MethodsSixty-four mature rabbits were randomly divided into four groups. The hearts in vitro removed to Langendoff equipment, then perfused with different buffer solution base on the Krebs-Henseleit buffer(KHB) for 30min. Then cardiac arrest was induced for 30min followed by 60min reperfusion. Coronary flow(CF) was recorded. Coronary effluent solution was collected for CK measurion. The dynamic change of myocardial NO content was measured. ResultsBy the treatment with BH4, CF was significantly increased, and CK was decreased than other groups after reperfusion(P

【Key words】 Tetrahydrobiopterin; Myocardial Ischemia-Reperfusion Injury; ATP-Sensitive Potassium Channels; Nitric Oxide Synthase

BH4是所有NOS同功酶的輔助因子，具有穩(wěn)定NOS結(jié)構(gòu)、穩(wěn)定NOS活性二聚體、增加L-精氨酸和NOS結(jié)合力、促進(jìn)NO的合成與釋放等作用，與內(nèi)皮功能密切相關(guān)[1,2]。外源性補(bǔ)充BH4能保護(hù)缺血再灌注心肌[3]，但是具體作用機(jī)制仍不清楚。本實(shí)驗(yàn)通過觀察四氫生物蝶呤(tetrahydrobiopterin, BH4)、5-羥基癸酸鹽(5-hydroxydecanoate, 5-HD) 和左旋硝基精氨酸甲酯(Nω-nitro-L-arginine methyl ester, L-NAME)對(duì)缺血再灌注心臟冠脈流量（coronary flow, CF）、一氧化氮(nitric oxide, NO)含量、肌酸激酶（creatine kinase, CK）的影響，研究線粒體三磷酸腺苷敏感性鉀通道(mitochondrial ATP-sensitive potassium channel, mitoKATP) 、一氧化氮合酶(nitric oxide synthase, NOS)對(duì)四氫生物蝶呤減輕心肌缺血再灌注損傷（myocardial ischemia reperfusion injury, MIRI）作用的影響，探討四氫生物蝶呤保護(hù)缺血再灌注心肌作用的可能機(jī)制。

1 材料和方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物與分組

健康成熟的大白兔64只(廣東醫(yī)學(xué)院動(dòng)物中心提供，體質(zhì)量2.0~2.5 kg，雄雌各半)，隨機(jī)數(shù)字表法隨機(jī)分入對(duì)照組（組Ⅰ）和BH4組（組Ⅱ）、BH4+ L-NAME組（組Ⅲ）、BH4+5-HD組（組Ⅳ），每組16只。

1.2 主要儀器和試劑

自制Langendorff離體心臟灌注裝置，全自動(dòng)生化分析儀(美國Beckman公司, CX-4 型)，L-NAME、5-HD、BH4購自美國Sigma公司。NO檢測(cè)試劑盒購自南京建成生物有限公司。

1.3 離體心臟Langendorff灌流模型

實(shí)驗(yàn)動(dòng)物3%戊巴比妥鈉(30 mg/kg)麻醉，肝素鈉(150 IU/kg)抗凝后，迅速開胸取出心臟，立即浸入4℃ K-H液中，排盡殘血，連接于Langendorff模型灌注裝置上，以37℃ K-H液經(jīng)主動(dòng)脈插管逆行灌注30 min，灌注壓恒定為70 cm H2O，灌注液持續(xù)通入95%O2-5%CO2混合氣(流量3 L/min)。停搏前20 min BH4+ L-NAME組（組Ⅲ）、BH4+5-HD組（組Ⅳ）分別用加入L-NAME、5-HD的K-H液進(jìn)行灌注10min。停搏前10 min BH4組（組Ⅱ）、BH4+ L-NAME組、BH4+5-HD組均用加入BH4的K-H液灌10 min。經(jīng)30 min灌流后，灌注40 ml 4℃ St. Thomas心臟停搏液進(jìn)行停搏，時(shí)間30 s。心臟停跳期間溫度保持在37℃~38℃。心臟缺血30 min后，以37℃ K-H液再灌注60 min。

BH4、5-HD、L-NAME最終濃度為10、100、100 μmol/L。

1.4 觀察指標(biāo)及方法

1.4.1 在灌注10min、再灌注10 min、再灌注30 min、再灌注60 min4個(gè)時(shí)點(diǎn)收集冠脈流出液記錄冠脈流量CF。

1.4.2 全自動(dòng)生化分析儀分析上述4個(gè)時(shí)點(diǎn)冠狀動(dòng)脈流出液CK含量。

1.4.3 分別取缺血30 min、再灌注60 min的心室肌，硝酸還原酶法測(cè)定心肌組織NO含量。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

數(shù)據(jù)以均值±標(biāo)注差（ ±s）表示，用SPSS 13.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。組間、組內(nèi)數(shù)據(jù)比較均用方差分析，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1與對(duì)照組相比，用含BH4的K-H液灌注的組Ⅱ再灌注后的CF、心肌組織NO含量增加(P

2.2使用含NOS抑制劑L-NAME（組Ⅲ）或mitoKATP抑制劑5-HD（組Ⅳ）預(yù)處理，與組Ⅱ相比，CF降低(P

3 討論

內(nèi)、外源性NO在缺血預(yù)適應(yīng)(ischemia preconditioning, IP)心肌保護(hù)中(包括早期、第二期)起重要作用，不僅是觸發(fā)因子，也是效應(yīng)因子[4]。機(jī)體內(nèi)產(chǎn)生的NO是由NOS催化非必需氨基酸左旋精氨酸(L-arginine, L-Arg)和O2生成的。BH4是所有NOS同功酶的輔助因子 [1-2]。內(nèi)源性NO的生成量嚴(yán)格依賴適當(dāng)?shù)腂H4水平[5]。BH4水平的減少可導(dǎo)致NOS功能失調(diào)，產(chǎn)生過量的氧自由基而代替NO的產(chǎn)生，進(jìn)而導(dǎo)致內(nèi)皮和心肌細(xì)胞功能降低[6]。

CK絕大部分存在于心肌細(xì)胞胞漿內(nèi)，心肌細(xì)胞以外含量甚微，是一種心肌特異性酶。所以，檢測(cè)冠脈回流液中CK的含量可以反映心肌酶漏出的程度，間接反映心肌損傷程度[7]。CF的多少則可反映冠狀動(dòng)脈的擴(kuò)張程度，從而觀察冠脈內(nèi)皮細(xì)胞的功能和損傷程度。

mitoKATP被公認(rèn)為是心肌保護(hù)作用中的一個(gè)關(guān)鍵環(huán)節(jié)[8]。mitoKATP的開放不僅參與IP的第一窗保護(hù)作用，而且也參與第二窗保護(hù)作用，不僅能作為啟動(dòng)因子誘導(dǎo)IP，同時(shí)也是IP重要的效應(yīng)器。它的開放能減輕MIRI [9]。

實(shí)驗(yàn)結(jié)果提示外源性BH4可提高NOS的活性，促進(jìn)內(nèi)源性NO的產(chǎn)生，發(fā)揮NO對(duì)心肌和冠狀血管內(nèi)皮的保護(hù)作用，減少CK的漏出，增加CF。表明BH4能增強(qiáng)冠脈系統(tǒng)的擴(kuò)張，有利于停搏液在心肌的均勻分布和降溫，而在再灌注時(shí)則促進(jìn)有害物質(zhì)排出，減輕心肌酶的漏出，從而減輕心肌損傷，而這種保護(hù)作用也與mitoKATP的開放有關(guān)。

參考文獻(xiàn)

[1] Fukuda Y, Teragawa H, Matsuda K, et al. Tetrahydrobiopterin restores endothelial function of coronary arteries in patients with hypercholesterolaemia. Heart, 2002,87(3):264-269.

[2] Higashi Y, Sasaki S , Nakagawa K, et al. Tetrahydrobiopterin enhances forearm vascular response to acetylcholine in both normotensive and hypertensive individuals. Am J Hypertens, 2002, 15(4):326-332.

[3] Werner ER, Antonius C.F. Gorren, Regine H, et al. Tetrahydrobiopterin and nitric oxide: Mechanistic and pharmacological aspects.Experimental Biology and Medicine, 2003, 228(11): 1291-1302.

[4] Lochnerl A, Marais E, Du Toit E, et al. Nitric Oxide Triggers Classic Ischemic Preconditioning. Ann. N.Y. Acad. Sci., 2002, 962(5): 402-414.

[5] Katusic ZS. Vascular endothelial dysfunction:does tetrahydrobiopterin play a role? Am J Physiol Heart Circ Physiol, 2001, 281(3):981-986.

[6] Xia Y, Tsai AL, Berka V, et al. Superoxide generation from endothelial nitric oxide synthase: A Ca2+/calmodulin-dependent and tetrahydrobiopterin regulatory process. J Biol Chem, 1998, 273(40):25804-25808.

[7] Carden DL,Grander DN. Pathophysiology of ischemia-reperfusion injury. J Pathol, 2000, 190(3): 255-266.

第4篇

撰寫人：___________

日

期：___________

2021年保險(xiǎn)公司轉(zhuǎn)正工作總結(jié)

記錄是最好的一種督促自己成長(zhǎng)的方式，記錄也是最好的見證自己成長(zhǎng)的方式。莎總說：沒有記錄就沒有發(fā)生。從今天起，堅(jiān)持寫工作日志，試問你自己就不寫工作日志，你怎么能要求外勤伙伴寫呢?你有什么資格?一天不重要，十天不重要，一個(gè)月，一個(gè)季度，一年呢?學(xué)會(huì)養(yǎng)成自己的工作包括生活的習(xí)慣。每天堅(jiān)持將自己的工作，分為新人檔案，績(jī)優(yōu)檔案，主管檔案進(jìn)行記錄。我今天要做什么?我今天做了些什么?他們今天要做什么?他們今天做了些什么?有沒有達(dá)到預(yù)期值?有哪些東西需要馬上更正或者是補(bǔ)充的建立自己的工作模式，工作線條，刻不容緩!

記錄，是一筆財(cái)富。計(jì)劃性的記錄與總結(jié)性的記錄更是一筆財(cái)富。

除了上述的這些，當(dāng)然還有很多很多的感悟，以及感悟后后期要做，比如客戶經(jīng)營(yíng)，客戶經(jīng)營(yíng)不僅僅是計(jì)劃1的經(jīng)營(yíng)，作為一名組訓(xùn)，更多更重要的是將客戶經(jīng)營(yíng)的概念植入到我們自己，植入到業(yè)務(wù)員的骨髓深處，___產(chǎn)說會(huì)沒有人，其實(shí)就是客戶經(jīng)營(yíng)出了問題。除了每天檢查工作日志外，還要檢查客戶檔案并輔導(dǎo)建立和完善客戶檔案，還包括客戶的緊急聯(lián)絡(luò)卡，方便拓展客戶。

當(dāng)然也還有學(xué)到實(shí)戰(zhàn)性的課程壽險(xiǎn)與家庭財(cái)務(wù)規(guī)劃。我們的客戶到底在煩惱什么：是買車或者是還房貸重要還是買保險(xiǎn)重要?以客戶的心理分析問題，因?yàn)榭蛻敉籣__自己面對(duì)的問題;家庭的風(fēng)險(xiǎn)并不僅僅是___問題，是的，您買房需要錢，您孩子的教育需要錢，您的養(yǎng)老需要錢，其實(shí)您的一生哪都需要錢，那你就必須需要有一個(gè)專業(yè)的金融工具提供幫助。老祖宗說：要留足過冬的糧食，可是儲(chǔ)存的地方不好，會(huì)留存到冬天嗎?第一次深刻懂得：保險(xiǎn)的目的不是改變生活，而是防止現(xiàn)有的生活被改變。很多人都追求有錢有權(quán)，李雙江有錢嗎?有，有權(quán)嗎?有，可是他快樂嗎?不快樂!重點(diǎn)看錢怎么用。確實(shí)，聽鄭老師的家庭財(cái)務(wù)規(guī)劃，讓你覺得你就是在與客戶心與心之間的對(duì)話。如果我們的績(jī)優(yōu)能做到這一點(diǎn)，如果我自己能讓我們的外勤伙伴做到這一點(diǎn)，保險(xiǎn)市場(chǎng)將是何其之大，何其之廣!

要說感悟和啟發(fā)，還有很多很多，那就把這還有很多很多的感悟和啟發(fā)___，落實(shí)到工作行動(dòng)當(dāng)中吧。一路走來風(fēng)雨人生，曾經(jīng)的困苦和挫折化為前行的力量，感受了生命蛻變的痛楚和成長(zhǎng)的喜悅，讓我不斷的成長(zhǎng)進(jìn)步充實(shí).

為期四天的培訓(xùn)，總公司給本次培訓(xùn)傾注了大量心血，配備了強(qiáng)大的講師陣容，生話上的無微不至，學(xué)習(xí)上的傾囊相授.足見對(duì)我們的重視和關(guān)愛!通過對(duì)行業(yè)前景展望的學(xué)習(xí)，知道了蓬勃發(fā)展的___;感受了生命力量中的生命速度生命現(xiàn)象生命奇跡;明白了家庭財(cái)務(wù)規(guī)劃一定要站在利他行善的立場(chǎng)上，才能更好地為客戶保駕護(hù)航;懂得了專業(yè)化銷售流程輔導(dǎo)，對(duì)新人專業(yè)系統(tǒng)實(shí)戰(zhàn)的意義所在，更好地喚醒客戶的潛在需求;理解了只有用心經(jīng)營(yíng)好客戶管理，分清ABCD類客戶有的放矢，培育好影響力中心，才能唯有源頭活水來;領(lǐng)悟了一切成交來自于服務(wù)的內(nèi)涵。

在這個(gè)沒有硝煙的壽險(xiǎn)戰(zhàn)場(chǎng)上，群雄逐鹿諸候爭(zhēng)霸。通過對(duì)績(jī)優(yōu)建設(shè)的學(xué)習(xí)，才知善抓新人者長(zhǎng)、善抓主管者久、善抓績(jī)優(yōu)者強(qiáng)的含義所在。讓理念、架構(gòu)、節(jié)奏、模式植入腦海并身躬力行;用好公司的榮譽(yù)體系和節(jié)點(diǎn)方案，實(shí)現(xiàn)季度、月平臺(tái)的維持和增長(zhǎng)。應(yīng)該說團(tuán)結(jié)就是力量，共識(shí)才能共為，營(yíng)業(yè)區(qū)的保費(fèi)和穩(wěn)步發(fā)展一定來自高效會(huì)議經(jīng)營(yíng)。因?yàn)橹挥薪y(tǒng)一思想才有戰(zhàn)斗力。在這個(gè)無利不起早的浮躁時(shí)代，用好基本法幫外勤精打細(xì)算，激發(fā)內(nèi)心欲望啟動(dòng)意愿而更好更快地升官發(fā)財(cái)，實(shí)現(xiàn)可持續(xù)發(fā)展。牢記一個(gè)人不愿意承受工作壓力，就永遠(yuǎn)地承受生活壓力的警鐘;用空杯心態(tài)同時(shí)放大空杯容納萬物，且行且思且感且悟!

應(yīng)該說本次培訓(xùn)非常實(shí)戰(zhàn)實(shí)用實(shí)際，我們來這里不但是學(xué)習(xí)，更重要的是做到學(xué)有所知學(xué)有所行學(xué)有所悟，求新求變求發(fā)展。把知識(shí)轉(zhuǎn)化為生產(chǎn)力，讓外勤隊(duì)伍獲得能量更好地展業(yè)增員，才是自己存在的價(jià)值。這就要求我不能只做語言上的巨人，行動(dòng)上的矮人。只有勇敢地承擔(dān)責(zé)任，才能承擔(dān)更大的責(zé)任地。內(nèi)勤松一尺外勤就會(huì)松一丈，就更需要我們意志堅(jiān)定充滿___以終為始，做個(gè)有心人。同業(yè)務(wù)員抱成一團(tuán)打成一片然后舉一反三，做好四訓(xùn)一會(huì)，季經(jīng)營(yíng)月經(jīng)營(yíng)周經(jīng)營(yíng)日經(jīng)營(yíng)的細(xì)化和量化，協(xié)助營(yíng)服經(jīng)理做好份內(nèi)份外的工作。

萬丈紅塵三杯酒，千秋大業(yè)一壺茶，大道無疆大方無域，在人生的舞臺(tái)上，人生因夢(mèng)想而偉大，因務(wù)實(shí)而成真。如何叫長(zhǎng)河為酥酪變大地為黃金?珍惜身邊的人眼前的人，只要你敢想敢做，敢超越敢創(chuàng)新，則一切皆有可能!

但一切從一名組訓(xùn)做起，一名站著能講、坐著能寫、躺著能想的合格、優(yōu)秀的組訓(xùn)。

第5篇

今天，當(dāng)我重新理解這段話的含義，便發(fā)現(xiàn)它被賦予了更深刻的內(nèi)涵，那就是愛崗敬業(yè)，無私奉獻(xiàn)。今天，我要贊美這么一群人，她們就是國壽的全體巾幗女員工。

伴隨著國壽業(yè)績(jī)的蒸蒸日上，在日常工作中，她們作為普通員工沒有驚天動(dòng)地的壯舉，工作也都是點(diǎn)點(diǎn)滴滴，卻無處不體現(xiàn)著平凡而閃光之處，在干練而和善的外表下人人都有一顆積極進(jìn)取和勇于奉獻(xiàn)的心---愛崗敬業(yè)為國壽,爭(zhēng)優(yōu)創(chuàng)先鑄輝煌。

我在國壽分公司工作二十二年，國壽巾幗女職工們干一行愛一行、吃苦耐勞、愛崗敬業(yè)的精神，深深感染著我。就拿我們國壽的柜面之星張志麗來說吧，工作好幾年，經(jīng)驗(yàn)豐富，屢受客戶的好評(píng)。當(dāng)大家夸獎(jiǎng)她時(shí)，她總是謙虛地說：“過獎(jiǎng)了，要做好服務(wù)，使客戶滿意還要努力。”她這么說，也這么做。一有空總是學(xué)習(xí)，學(xué)習(xí)各種知識(shí)，學(xué)習(xí)說話，做到音準(zhǔn)字美。是啊，柜面工作就是要服務(wù)好客戶，要有豐富淵博的知識(shí)回答客戶的各種提問，要回答如流，讓客戶放心滿意；說話溫柔情真意切，讓客戶感到親切愉悅。真誠服務(wù)是我們工作的出發(fā)點(diǎn)和歸宿，所有的客戶都是我們的上帝。我們要做到用心服務(wù)，微笑服務(wù)。用心服務(wù)就是要求我們用自己的思想，用自己的知識(shí)，用自己的技能，全心全意，毫無保留地服務(wù)好客戶的所有要求。微笑服務(wù)就是要求我們用自己的聲音，用自己的情感，贏得客戶心。我們要用真誠服務(wù)贏得客戶，為公司創(chuàng)造效益，也為我們自己釀造甜蜜的生活。

隨手翻開國壽女同志們的工作筆記，只見上面密密麻麻地記錄著客戶的具體情況。星期天，本來我們可以陪著家人，孩子度過快樂的時(shí)光，可是我們知道客戶更需要我們。我們?nèi)タ赐麄儙サ牟恢皇侨ナ杖”ＹM(fèi)，更重要的是他們需要的保障。我記得，曾經(jīng)這樣說，“作為一名國壽職工能給別人送去保障，我覺得我們的付出真的很值了！”是啊，還有什么比這重要呢？

創(chuàng)先爭(zhēng)優(yōu)的力量來自大家的相互扶持、相互協(xié)作。當(dāng)一位女同志生了病，這時(shí)，其他幾名女同志會(huì)主動(dòng)承擔(dān)起她的工作，甚至得知有同事生病后，輪換休息的同事們也紛紛主動(dòng)打電話回單位要求繼續(xù)工作……她們?nèi)硇膿湓诠ぷ魃蠀s顧不了自己的小家，有的女同志孩子還小需要照顧，她們把自己家庭的事情全部交親人代管。每次完成一項(xiàng)任務(wù)，國壽的巾幗姐妹們都更加的努力，更加的團(tuán)結(jié)，因?yàn)椋谒齻兊男闹卸加幸粋€(gè)堅(jiān)不可摧的信念---眾志成城，創(chuàng)先爭(zhēng)優(yōu)。

從我們中國人壽發(fā)展現(xiàn)狀來看，國壽女職工最需要的就是大無畏的挑戰(zhàn)精神與爭(zhēng)先創(chuàng)優(yōu)的氣魄，胸懷目標(biāo)、矢志不移的堅(jiān)定信念，無所畏懼、勇往直前的工作態(tài)度，心系國壽、患難與共的愛崗敬業(yè)情懷。為著爭(zhēng)先創(chuàng)優(yōu)，讓我們放下心中的等待和彷徨,讓我們?cè)隗w會(huì)愛崗敬業(yè)的潮涌中全身心地投入到中國人壽事業(yè)中去，讓我們學(xué)習(xí)那些曾經(jīng)的愛崗巾幗楷模并記錄在心間，作為我們勵(lì)志奮斗的坐標(biāo),伴隨著我們?nèi)?shí)現(xiàn)心中那份平凡而偉大的理想。

中國人壽帶給了我們不同于眾的人生，經(jīng)歷了不同的工作崗位，對(duì)工作的感悟也就更加深厚。也許生活的意義，不僅僅是為了生存，而是給個(gè)人的生活賦予意義，給自己的生命賦予光彩。十五年前，我們的職業(yè)生涯面臨著新的選擇，新的崗位、新的環(huán)境，一切對(duì)我們來說都是陌生的，同時(shí)又是充滿挑戰(zhàn)的。在我們努力學(xué)習(xí)、不斷提升自我的同時(shí)，也深深體會(huì)到了工作的壓力和艱辛，但是身邊姐妹門的互相鼓勵(lì)和互相幫助,讓我們變得更加堅(jiān)強(qiáng)；我們明白，這種工作閱歷帶來的人生財(cái)富是無法用金錢來衡量的。坦然地接受工作帶給我們的一切，除了益處和快樂，還有艱辛和忍耐---這就是工作的意義……中國人壽帶給了我們耕耘的艱辛和收獲的喜悅，使我們的人生更加豐富多彩，使我們?cè)谏畹臍v練中變得更加成熟和睿智。面對(duì)收獲，面對(duì)成功，我們感受到了自身價(jià)值的實(shí)現(xiàn)；面對(duì)困難，面對(duì)壓抑和不愉快，我們感受到了成長(zhǎng)的代價(jià)……

第6篇

“美是到處都有的。對(duì)于我們的眼睛，不是缺少美，而是缺少發(fā)現(xiàn)”。學(xué)會(huì)觀察社會(huì)、觀察生活、認(rèn)識(shí)事物。

學(xué)生認(rèn)識(shí)的不僅僅是課文中“九百”、“銀絲”、“斷掉”這樣的文字。教學(xué)過程中，通過聲音、影像等情景創(chuàng)設(shè)，置身絕壁，感悟臺(tái)階的漫長(zhǎng)、陡峭、危險(xiǎn)，人行尚且艱難，掃路人勞動(dòng)環(huán)境的艱辛可想而知，崇敬、尊重、愛憐、心碎等復(fù)雜感情交織在一起，純潔而感傷的情感會(huì)在心中升起，凈化心靈，陶冶情操教學(xué)目標(biāo)自然實(shí)現(xiàn)。

如果小學(xué)生的表達(dá)失去了心靈的自由和本真的情思，“立意”愈高，人格將會(huì)愈低。讓學(xué)生的表達(dá)反映自己的生活是天然合理的，也是最有教育意義的，最吸引人和感動(dòng)人的，從根本上來說這樣的學(xué)生表達(dá)自然是健康的。

二、盡情傾吐，無拘無束

我一直堅(jiān)持以“讓學(xué)生暢所欲言為本”，減少對(duì)學(xué)生的束縛，為學(xué)生的創(chuàng)造一個(gè)自由的空間，尊重學(xué)生的每次表達(dá)，利用一切機(jī)會(huì)欣賞課文，欣賞他人、欣賞自我，為他們提供一個(gè)自由感悟的舞臺(tái)。

課文中“一上一下一千八百多級(jí)。……游客們氣喘吁吁……望而卻步。”年過七旬的掃路人，在這樣環(huán)境中求生，還說“不累，不累”。難道他不想退休過上孫兒繞膝，安享晚年舒逸生活；學(xué)生們自己也在思考，他能享受退休工資嗎？有保險(xiǎn)嗎？不是工人60歲就得退休嗎？他70多歲了還要在這么危險(xiǎn)的環(huán)境中掃路，難道他不擔(dān)心自己生命安全嗎？他之所以說不累，是不是害怕領(lǐng)導(dǎo)認(rèn)為他不能勝任，辭退他，反而失去生存的依靠？……學(xué)生把想說的話盡情傾吐，極大限度地激發(fā)學(xué)生說的積極性，既培養(yǎng)學(xué)生的情商，又為學(xué)生寫作積累情感基礎(chǔ)，是語文教學(xué)生活化、時(shí)代化、直觀化的一條可行之路。

三、感悟人生，凈化心靈

生活處處是文章，事事練達(dá)皆學(xué)問。在情景創(chuàng)設(shè)教學(xué)中，有的學(xué)生接受能力強(qiáng)，表達(dá)水平提高比較快，有的學(xué)生表達(dá)水平很難提高。如何令這部分學(xué)生由不會(huì)說到會(huì)說呢？成為我關(guān)注的問題。

課文說“天游峰是武夷山的第一險(xiǎn)峰。”許多游客望而卻步，作者順著銀絲上了峰頂，心里正在得意之時(shí)，看見一位面色黝黑，瘦削的臉，身穿一套褪色的衣服，足蹬一雙棕色的運(yùn)動(dòng)鞋的老人，正借著淡淡的星光用一把竹掃帚淡然的清掃著路面。黑、瘦、衣服褪色、星光等文字告訴讀者，老人生活清苦，勞動(dòng)時(shí)間特殊，要等游客下山才能清掃臺(tái)階，早上為新來的游客掃清路面，晚上打掃上山游客留下的垃圾，他工作平凡，心靈高尚；他不辭辛勞，無怨無悔；如果游客人人愛護(hù)環(huán)境，不僅是對(duì)老人的幫助，也是在幫助游客自己，凈化游客的心靈。學(xué)生們暢談自己感受，聯(lián)系身邊的大事小事，氣氛活躍，好不熱鬧！

打開心靈的窗戶，真情地感悟人生的甘甜與辛酸！成就他們的人生，育人的功能得到發(fā)揮。

四、深層感悟，以悟促說

說出心理真實(shí)感悟是教改探索的一種境界。課文中，老人悠然地說：“我早該退休了。可我實(shí)在離不開這里……有花鳥作伴，我能舍得走嗎？”。學(xué)生感悟到老人豁達(dá)、自信、悠然；也感悟到老人艱難、辛酸、無奈；許多人感悟到老人崇高、無私、奉獻(xiàn)！

讀罷此文，縱使你真產(chǎn)生“辛酸”的感悟，也不能證明老人掃路生活辛酸。現(xiàn)實(shí)生活中許多老人以助人為樂，不計(jì)報(bào)酬，他們的胸懷與情操不是我們一把人能感悟透的！

第7篇

閱讀下面的文字，根據(jù)要求作文。

2008年3月31日，中央電視臺(tái)《藝術(shù)人生》劇組來到泰山錄制“清明特別節(jié)目”。結(jié)束時(shí)，特約嘉賓，北京師范大學(xué)教授于丹發(fā)表登山感悟：山登絕頂我為峰。這不僅是登山的境界，也應(yīng)該是每個(gè)人的豪邁氣概。另一位特約嘉賓，《百家講壇》評(píng)《三國》的主講易中天的感悟則是：人生就像登山，不一定每個(gè)人都能爬到山頂，但爬了就好；不一定每個(gè)人都要登到山頂，但一定要一步一個(gè)腳印。

要求全面理解材料，但可以選擇一個(gè)側(cè)面、一個(gè)角度構(gòu)思作文。自主確定立意，確定文體，確定標(biāo)題，不少于800字；不要脫離材料的含意作文，不要套作，不得抄襲。

寫作指導(dǎo)

我們對(duì)這則材料的審題可以有如下的立意：

于丹的角度：①勇攀高峰，志存高遠(yuǎn) ②要有奮勇爭(zhēng)先的豪邁氣概 ③爭(zhēng)強(qiáng)好勝，永不服輸 ④勇立潮頭，做社會(huì)的變革者 ⑤成功屬于不屈不撓者

易中天的角度：①做任何事情都重在參與②走好人生的每一步 ③力所能及了無遺憾 ④量力而行，盡力就可 ⑤享受過程，別有洞天

“橫看成嶺側(cè)成峰，遠(yuǎn)近高低各不同。”材料的意義多了，確定自己的觀點(diǎn)時(shí)，一定要注意找出一個(gè)對(duì)自己寫作有利的角度去寫。也就是說作者在選擇最佳切入點(diǎn)時(shí)，既要考慮最佳角度，也要考慮最適合自己展開的角度，即別人少有顧及的意向而自己卻感悟最深、有話可說且能把話說好的角度。

另外，寫作時(shí)，為了保險(xiǎn)，最好能引用材料中和你的角度、觀點(diǎn)相關(guān)的句子加以分析、假設(shè)，這樣立論就扣住了“不要脫離材料的含意作文”的要求。觀點(diǎn)有出處，有來由，言之有理，容易得到閱卷人的認(rèn)可，否則極易被判為偏題。準(zhǔn)確理解材料的含意，根據(jù)自己的知識(shí)儲(chǔ)備、生活經(jīng)歷和思想認(rèn)識(shí)選定作文中心（選取材料中的一個(gè)“意義點(diǎn)”），即可構(gòu)思作文。

例文展示

參與，就是好的

♥黃靈

參與了挑戰(zhàn)，才能證明自己；

參與了奮斗，才能領(lǐng)悟快樂；

參與了……

顧拜旦曾對(duì)奧運(yùn)大家庭寫下這樣一句話：參與，就是好的。易中天也曾感悟：人生就像登山，不一定每個(gè)人都能爬到山頂，但爬了就好。顧拜旦的話和易中天的感悟，都說明了同一個(gè)道理：做任何事都重在參與。參與，就是好的。

參與也能證明自己

誰說一定要成功才能證明實(shí)力，誰說一定要獲得金牌才能證明自己？一位年近40歲的短跑女將從未獲得奧運(yùn)金牌，但她已參與了五屆奧運(yùn)會(huì)，當(dāng)她站在年輕人中間時(shí)，格外搶眼，她頑強(qiáng)拼搏，敢于挑戰(zhàn)并享受著參與奧運(yùn)會(huì)的快樂，贏得了眾人的喝彩。

沒有金牌的光芒，沒有奏響的國歌，但她的參與精神已然引起關(guān)注；沒有頂尖的成績(jī)，沒有年輕的實(shí)力，但她的參與精神足以贏得掌聲！參與就是好的，一樣能證明自己。

參與也能領(lǐng)略快樂

前兩屆CCTV模特大賽，出現(xiàn)了一位媽媽級(jí)參賽選手。為了豐富自己的生活，她走上了舞臺(tái)，因年齡的原因，她自然比不過年輕貌美的其他選手，但是她在參與的比賽中，都能自信、微笑地走臺(tái)，感受著參與的快樂。被淘汰時(shí)，她說：“我的過程是在探索，參加比賽就是重在參與，參與了就是最棒的，我很快樂，收獲到了很多東西。

……

參與也能收獲經(jīng)驗(yàn)

北京奧運(yùn)會(huì)開幕之后的第一個(gè)比賽日，浙江小將孫揚(yáng)站在了“水立方”的賽場(chǎng)上，開始了他奧運(yùn)會(huì)的“處子秀”。 對(duì)于今年才16歲的孫揚(yáng)，畢竟大賽經(jīng)驗(yàn)還非常缺乏，小組預(yù)賽結(jié)果，孫揚(yáng)3分50秒90，小組排名第七。盡管無緣決賽，但作為年輕的潛力選手，能參加奧運(yùn)會(huì)，對(duì)他，已經(jīng)是一種成功。這次參賽經(jīng)歷將讓孫揚(yáng)收獲了寶貴的經(jīng)驗(yàn)。

他的教練婁紅梅說：“這次奧運(yùn)會(huì)，對(duì)孫揚(yáng)是一種成長(zhǎng)和鍛煉，會(huì)讓他收獲一些大賽的經(jīng)驗(yàn)，逐步成熟起來。”婁紅梅對(duì)這位弟子充滿了信心，相信他通過這次經(jīng)驗(yàn)的積累，在今后的比賽中，會(huì)有更好的發(fā)揮。

參與能證明自己，感悟激情，領(lǐng)略快樂，收獲經(jīng)驗(yàn)，它將成為我們一生的財(cái)富，美好的回憶。

可以說，爬上山頂是強(qiáng)者，但未登頂?shù)囊膊灰馕吨　５巧剑⒅氐氖堑巧降倪^程，登山的樂趣在于參與其中所領(lǐng)略的沿途風(fēng)景，所付出的努力，收獲的快樂。

參與，讓我們成為了風(fēng)景中的一部分；參與，讓我們創(chuàng)造了快樂的過程。

參與，就是好的！

第8篇

1 激勵(lì)學(xué)生自己學(xué)數(shù)學(xué)

現(xiàn)代心理學(xué)研究表明：任何學(xué)習(xí)都是學(xué)習(xí)者自主建構(gòu)的過程 。在這個(gè)過程中，離不開學(xué)習(xí)主體與文本之間的交互作用。有意義的接受學(xué)習(xí)是自主建構(gòu)。有意義的發(fā)現(xiàn)學(xué)習(xí)也是自主建構(gòu)。在學(xué)習(xí)過程中，既沒有絕對(duì)的接受學(xué)習(xí)，也沒有絕對(duì)的發(fā)現(xiàn)學(xué)習(xí)，總是兩者相互交替，有機(jī)結(jié)合的。在這個(gè)過程中，建構(gòu)主義強(qiáng)調(diào)學(xué)習(xí)者主動(dòng)接觸外界的信息（包括課本），并用自己已有的知識(shí)與經(jīng)驗(yàn)去解讀這些信息，從而賦予認(rèn)識(shí)對(duì)象以心理意義，如講平方差公式時(shí)，先在屏幕上打出： ① （1+2x）（1-2x） ② （2a+3）（2a-3） ③ （100+1）（100-1） ④ （x+3）（x-3）讓學(xué)生比賽計(jì)算，看誰做得又快又好，并且讓學(xué)生自己找找看看，存在什么規(guī)律，當(dāng)你找到規(guī)律時(shí)，"平方差公式"就找到了。（學(xué)生個(gè)別學(xué)習(xí)3分鐘）。接下來，分組討論交流想法。得出結(jié)論：（a+b）（a-b）=a2-b2。在交流的過程中時(shí)中，學(xué)生交流的不僅僅是知識(shí)，同時(shí)還包含方法方面的交流，情感態(tài)度價(jià)值方面的交流，并且記錄下自己的設(shè)想。這種交流達(dá)到了更大范圍的資料整合。這樣，在教學(xué)中學(xué)生做到手到、眼到、口到、心到，學(xué)會(huì)了認(rèn)真看書、仔細(xì)觀察、用心思考、用心體會(huì)的好習(xí)慣，真正學(xué)會(huì)"讀"數(shù)學(xué)書。

2 激發(fā)學(xué)生"用數(shù)學(xué)"

新課程提倡學(xué)生初步學(xué)會(huì)從數(shù)學(xué)的角度提出問題，理解問題，并能綜合應(yīng)用所學(xué)的知識(shí)技能解決問題的發(fā)展應(yīng)用意識(shí)。隨著社會(huì)主義市場(chǎng)經(jīng)濟(jì)體制的逐步形成。股票、利息、保險(xiǎn)、分期付款等經(jīng)濟(jì)方面的數(shù)學(xué)問題，已日漸成為人們的常識(shí)。因此數(shù)學(xué)教學(xué)不能視而不見，不管實(shí)際應(yīng)用，這樣恐怕就太不合時(shí)宜了。

學(xué)生學(xué)習(xí)知識(shí)是為了用知識(shí)。但長(zhǎng)期的應(yīng)試教育使大多數(shù)學(xué)生不知道為什么學(xué)數(shù)學(xué)，學(xué)數(shù)學(xué)有什么用。因此，在教學(xué)時(shí)，我針對(duì)學(xué)生的年齡特點(diǎn)、心理特征，密切聯(lián)系學(xué)生的生活實(shí)際，精心創(chuàng)設(shè)情境，讓學(xué)生在實(shí)際生活中運(yùn)用數(shù)學(xué)知識(shí)，切實(shí)提高學(xué)生解決實(shí)際問題的能力。如在講"圓周角定理推廣的應(yīng)用"時(shí)，首先創(chuàng)設(shè)情境"老奶奶不慎把一個(gè)圓形的玻璃鏡子掉在地上，打成了不易帶走的幾塊碎片，老奶奶很著急。你能想辦法幫助她嗎？把碎片重新拼成新的圓形的鏡子嗎？你能用學(xué)過的數(shù)學(xué)知識(shí)解決這個(gè)問題嗎？"――"破鏡重圓"是生活中很實(shí)在的問題，老師引導(dǎo)學(xué)生把課堂所學(xué)的知識(shí)和方法，運(yùn)用到生活實(shí)際中，鼓勵(lì)學(xué)生把生活中碰到的實(shí)際問題帶到課堂，嘗試著用數(shù)學(xué)方法解決，并注重解決問題策略的多樣性，這既有利于挖掘?qū)W生的潛力，又有利于培養(yǎng)學(xué)生初步創(chuàng)新能力。經(jīng)常這樣訓(xùn)練，使學(xué)生深刻地認(rèn)識(shí)到數(shù)學(xué)對(duì)于我們的生活有多么重要，學(xué)數(shù)學(xué)的價(jià)值有多大，從而激發(fā)了他們學(xué)好數(shù)學(xué)的強(qiáng)烈欲望，變"學(xué)數(shù)學(xué)"為"用數(shù)學(xué)"。

2 引導(dǎo)學(xué)生感受體驗(yàn)數(shù)學(xué)

尊重學(xué)生的不同感受及其思考的方向，引導(dǎo)學(xué)生主動(dòng)地富有個(gè)性地學(xué)習(xí)。如在學(xué)習(xí)"函數(shù)"時(shí)，我首先舉出生活中函數(shù)關(guān)系的例子，引導(dǎo)學(xué)生感受生活當(dāng)中的變量及變量之間的關(guān)系。對(duì)于變量，每個(gè)學(xué)生的感受是不同的。因此學(xué)生舉出很多生活中的變量的例子。

第9篇

剛剛把郭初陽老師的《一個(gè)獨(dú)立老師的語文之旅》看完了，合上書，感覺是一種幸福和一種幸運(yùn)——能夠安靜的讀書，能夠讀到這樣好的書，遇見這樣好的思想。

對(duì)于當(dāng)前的教育體制，中小學(xué)教材，郭初陽老師有很多的批判，顯然非常的沉重，這個(gè)體制，體制內(nèi)的很多措施，比如教材的選擇，時(shí)間的規(guī)定，教師的教法，很多都在侵蝕著學(xué)生們，這無疑是讓人心憂痛心的。但是不知是他的書即使全是批判但仍有希望的緣故，還是我習(xí)慣從樂觀的角度去考慮問題的緣故。我并沒有感到特別的痛苦。反而增了一些希望與信心。

誠然，這個(gè)教育體制有很多的弊病，需要變革，但如何不變革呢？身為一個(gè)小小語文老師的我，無法去改變，那么我能做什么，讓學(xué)生們少受這個(gè)體制的殘害呢？這是我要思考的。

比如，我們無法選擇使用哪種教材，但我們可以改變?cè)趺慈ソ蹋梢栽谟邢薜臋?quán)力與范圍內(nèi)選擇更多更好的文章或者說教材內(nèi)容讓我們的學(xué)生品悟（即我們可以用批判的眼光去看待文本，用淵博的知識(shí)去篩選文本），可以用更科學(xué)更合理的方式去教授。我們可以讓學(xué)生不僅接觸教材，他們可以接觸更多，只要我們努力。總之，我們可以盡己所能，去改變我們能改變的。這是我的感悟。

這段時(shí)間在一直在看書，看了書之后就想寫點(diǎn)東西，表達(dá)我的感悟，感想。雖然文筆不好，感悟不深，甚至頗多錯(cuò)誤，但是寫的沖動(dòng)卻是實(shí)實(shí)在在的。這使我發(fā)現(xiàn)，我們的學(xué)生為什么覺得寫作文是最痛苦的事，為什么寫的東西感覺是干巴巴的拼湊呢，我想，關(guān)鍵是他們沒有閱讀，因?yàn)殚喿x與寫作是相輔相成的啊，離開了閱讀，寫作只是一潭死水。正如朱熹先生所說，"問渠那得清如許，為有源頭活水來。"所以要想提高學(xué)生的寫作能力，唯有讓他們多閱讀，然后才能發(fā)于聲。

書讀完了，權(quán)且書摘一些吧。

1. 倘若中小學(xué)時(shí)期，就能有科學(xué)的方式來談?wù)撨@個(gè)重大的話題（指死亡教育），輔以一些優(yōu)秀的文本，比如圖畫書《爺爺?shù)奶焓埂沸≌f《馬提與祖父》等等，那該多好，因?yàn)樗劳鼋逃q如一支小小的疫苗，能極大地增強(qiáng)生命體的抵抗力。

2. 死亡教育，繃緊了生命之弦，讓人懂得珍惜生命中的每一天，努力尋找自己一生的意義。

3. 死亡教育的內(nèi)容：生命歷程；生命與死亡的意義；死亡主題的音樂、文學(xué)、繪畫等藝術(shù)鑒賞；自殺及其預(yù)防；如何面對(duì)親屬或朋友的死亡；喪葬文化；保險(xiǎn)與遺囑等。可以采用案例、影片、文學(xué)作品等。如《死亡的新意義》，菲費(fèi)爾

4. 一定要打開視野，營(yíng)造盡可能開放的課堂，將盡可能多的資料納入課堂。文本是開放的，文學(xué)、電影、音樂、動(dòng)畫以及生活中正在發(fā)生的事件……形式上也是開放的，傳授、講座、觀摩、閱讀、商議、辯論、話劇、社會(huì)調(diào)查實(shí)踐……在這個(gè)過程中，教師不要輕易發(fā)表自己的觀點(diǎn)，尤其要克制自己，不要將陳舊而不自知的觀點(diǎn)，灌輸給了孩子，應(yīng)該讓他們?cè)诟鞣N觀點(diǎn)的透明羅列中，自由選擇屬于他們自己的觀點(diǎn)。

5. 教師要打開自己，保持心靈的開放，用自己真實(shí)的生活與真切的思考，與孩子們建立聯(lián)系，在完整而不分裂的自我中，編織一張有凝聚力量的網(wǎng)。在他的課堂中，沒有人擁有絕對(duì)的真理，而每個(gè)人都有要求被理解的權(quán)力，每個(gè)人的生活經(jīng)歷的每個(gè)重要線索都得到尊重。

6. 生活與文學(xué)有著各自的原則：生活要盡量計(jì)算成本與收益，堅(jiān)持精力節(jié)省原則；文學(xué)要盡量使人恢復(fù)對(duì)生活的敏感，"使石頭顯出石頭的質(zhì)感",堅(jiān)持陌生化原則。兩條原則，前者要求節(jié)約時(shí)間、創(chuàng)造財(cái)富，后者要求延長(zhǎng)時(shí)間、醒覺生命。——我的理解：文學(xué)源于生活，但又讓人高于生活。

7. 藝術(shù)真實(shí)，并不是等于低級(jí)的準(zhǔn)確，藝術(shù)有屬于自己的內(nèi)在真實(shí)；只滿足與形似到亂真，拘泥于無足道的細(xì)節(jié)表現(xiàn)的畫家，將永遠(yuǎn)不能成為大師。……優(yōu)秀的藝術(shù)家，有的是持久、深入、廣泛的觀察——加倍的觀察。

8. "我的時(shí)間":我在一個(gè)巨大而透明的容器里面，想拔腿逃跑，腳已被埋住。 事實(shí)上，沙已沒到腰部了，只能動(dòng)彈不得地看著它一點(diǎn)點(diǎn)往上漲。 更多的沙從上面撒下來，抬頭看，依稀可見一只灰黑色的瘦骨嶙峋的手掌，就是從它的指縫里，不斷有沙子密密地降下。只要屏住呼吸，就能聽到這細(xì)雨般微弱的沙沙聲。 我還有多少時(shí)間。

9. 飲著狂泉（飲了此水，無不狂）長(zhǎng)大的搖身為教師的我們，是否正暗藏著火艾針?biāo)帲壑\共執(zhí)我們的孩子，對(duì)他進(jìn)行著痛苦的治療呢？這是我們無可補(bǔ)救的罪。

10. 我們過去的日子并非空虛，我們的日子像白米，每粒都是艱難，然而粒粒充實(shí)飽滿。

11. 我們應(yīng)當(dāng)知道，再偉大的教師也不過是人，要自知己身的限度，圣女小德蘭自比為一朵小百花，特蕾莎嬤嬤說自己只是一支鉛筆。跌倒后又站起、破碎了方愈合、心里作難的教師，深知三折肱為良醫(yī)的道理，帶著自己的傷痕，來更溫柔地幫助那未成年的孩子們。